應(yīng)用自體和同種異體半腱肌重建兔前叉韌帶后移植物組織學(xué)轉(zhuǎn)歸對(duì)比研究.pdf

1、目的：前交叉韌帶（anterior cruciate ligament，ACL）是膝關(guān)節(jié)的重要結(jié)構(gòu)，其主要功能是控制膝關(guān)節(jié)旋轉(zhuǎn)和防止脛骨過(guò)度前移或股骨后移，ACL損傷后可產(chǎn)生明顯的膝關(guān)節(jié)前向不穩(wěn)并導(dǎo)致一系列繼發(fā)性損害，可繼發(fā)關(guān)節(jié)軟骨、半月板等結(jié)構(gòu)損壞和骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生，影響功能，嚴(yán)重者可導(dǎo)致膝關(guān)節(jié)病廢。
　　 隨著我國(guó)現(xiàn)代交通工業(yè)的迅速發(fā)展以及體育運(yùn)動(dòng)的深入發(fā)展，ACL損傷發(fā)病率的不斷提高，關(guān)于ACL的研究日趨增多，隨著關(guān)節(jié)鏡技

2、術(shù)的快速發(fā)展，目前ACL斷裂后的治療方法主要是關(guān)節(jié)鏡下韌帶重建術(shù)。目前應(yīng)用應(yīng)用自體半腱肌腱和股薄肌腱重建ACL或者自體骨-髕腱（中1/3）-骨（BPTB）重建ACL的方法是國(guó)內(nèi)外重建ACL的主要方法，近幾年國(guó)內(nèi)選用異體移植物進(jìn)行ACL一期修復(fù)和返修手術(shù)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，ACL重建移植物的選擇以及重建后移植物的組織學(xué)轉(zhuǎn)歸一直是ACL修復(fù)與重建領(lǐng)域的一個(gè)重要的研究課題，對(duì)ACL重建術(shù)后的康復(fù)治療具有重要的指導(dǎo)意義。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察兔自體和同種異體

3、半腱肌重建ACL的組織學(xué)和組織化學(xué)變化，探討自體和同種異體移植物重建ACL塑型改建過(guò)程以及血管生成的區(qū)別。
　　 方法：
　　 1、動(dòng)物分組與取材
　　 24只骨骼成熟雄性新西蘭兔隨機(jī)分為兩組，分別接受自體半腱肌和同種異體半腱肌重建ACL，異體半腱肌的取材與保存是無(wú)菌操作下取同種異體的成年雄性新西蘭兔半腱肌，手術(shù)取髕腱內(nèi)側(cè)縱行切口，于脛骨結(jié)節(jié)內(nèi)后，大腿內(nèi)側(cè)，分離出半腱肌腱，修整干凈后每根分別以三層無(wú)菌密封袋封裝，

4、將標(biāo)本置入-80°冰箱內(nèi)保存14天后備用。
　　 2、手術(shù)方法
　　 每只新西蘭兔予20％氨基甲酸乙酯（烏拉坦）5ml/Kg耳緣靜脈注射及氯胺酮0.1g肌肉注射行全身麻醉，術(shù)前肌肉注射青霉素20萬(wàn)單位預(yù)防感染。雙膝術(shù)區(qū)備皮，消毒，鋪無(wú)菌手術(shù)巾。屈膝90度，取髕腱內(nèi)側(cè)縱行切口，予脛骨結(jié)節(jié)內(nèi)后，大腿內(nèi)側(cè)，分離出半腱肌腱，保留遠(yuǎn)端止點(diǎn)，向上自腱和肌腹交界處以上盡量靠近近端切斷，以保留盡量長(zhǎng)的半腱肌腱，剔除肌性部分，腱近端用3-

5、0的滌綸編織線縫編做為牽引線備用。沿髕腱內(nèi)側(cè)切開(kāi)至關(guān)節(jié)腔，外推髕骨致脫位，切斷翼狀皺襞，于上下止點(diǎn)處完整切除ACL，查前抽屜及Lachman試驗(yàn)陽(yáng)性，然后用1.5mm鉆頭自脛骨結(jié)節(jié)內(nèi)上骨面向原ACL下止點(diǎn)鉆骨道，通過(guò)該骨道再向上、向外、向后至股骨外髁髁間側(cè)面，靠近ACL上止點(diǎn)處鉆骨道，鉆通至股骨外髁外側(cè)的骨面，用鋼絲引導(dǎo)牽引線，將肌腱自內(nèi)側(cè)副韌帶的淺層，穿經(jīng)脛骨和股骨骨道，于屈膝位拉緊，用克氏針?lè)謩e于股骨脛骨干上鉆孔，以骨橋法將肌腱牢固

6、固定于股骨、脛骨外側(cè)的骨面上。查前抽屜及Lachman試驗(yàn)陰性后，慶大霉素鹽水沖洗關(guān)節(jié)腔和皮下，逐層間斷縫合切口。術(shù)后肌注青霉素1次（80萬(wàn)單位/次/天）。術(shù)后統(tǒng)一籠養(yǎng)，自由活動(dòng)。
　　 3、組織學(xué)觀察
　　 分別于術(shù)后3周、6周、12周、24周隨機(jī)取材，每次取3只，肉眼觀察關(guān)節(jié)腔內(nèi)重建韌帶的大體形態(tài)，HE、甲苯胺蘭及免疫組織化學(xué)染色，觀察關(guān)節(jié)腔內(nèi)重建韌帶的組織學(xué)變化過(guò)程及血管生成情況，并用Chalkley血管計(jì)數(shù)法對(duì)血

7、管生成數(shù)量進(jìn)行定量檢測(cè)。
　　 結(jié)果：解剖及組織學(xué)方面：兔交叉韌帶在大體解剖形態(tài)上與人類基本相同，重建后韌帶在關(guān)節(jié)內(nèi)經(jīng)歷了再血管化、細(xì)胞長(zhǎng)入、膠原纖維再生和再塑型的過(guò)程。組織學(xué)染色顯示術(shù)后3周時(shí)，組織內(nèi)部呈壞死狀態(tài)，周邊成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞開(kāi)始長(zhǎng)入，以炎性細(xì)胞為主。甲苯胺藍(lán)染色無(wú)異染物質(zhì)出現(xiàn)。免疫組化血管陽(yáng)性染色位于移植物韌帶束膜，自體移植物組和異體移植物組無(wú)明顯差別。術(shù)后6周自體移植物組進(jìn)入供體的血管（13.407±0.11）多于

8、同種異體移植物組（8.815±0.13），自體移植物組成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞數(shù)目多于異體移植物組，兩組甲苯胺藍(lán)染色無(wú)異染物質(zhì)出現(xiàn)。術(shù)后12周大量成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞進(jìn)入移植物，自體移植物組成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞數(shù)目多于異體移植物組，自體移植物組甲苯胺藍(lán)異染物質(zhì)開(kāi)始出現(xiàn)，兩組的免疫組化血管陽(yáng)性染色均增加，但異體移植物組（12.556±0.11）仍然少于自體移植物組（16.815±0.64）。術(shù)后24周，自體移植物組（分別為7.444±0.11）血管計(jì)數(shù)均

9、低于異體移植物組（分別為11.222±0.11），但仍比正常ACL（1.000±0.11）數(shù)目多，成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞呈較統(tǒng)一的梭形，周?chē)鷧^(qū)細(xì)胞核主要為紡錘體狀、桿狀，中心區(qū)圓形、橢圓形細(xì)胞核稍多，可見(jiàn)串珠樣排列，核周?chē)邢莞C，類似于軟骨細(xì)胞；膠原纖維縱向排列規(guī)律有序，并呈波狀，其組織學(xué)形態(tài)已經(jīng)類似正常ACL。異體移植物組細(xì)胞數(shù)目比自體移植物組多，膠原纖維束沿應(yīng)力方向排列、較規(guī)律。兩組甲苯胺蘭染色均可以見(jiàn)到異染。異體移植物組血管陽(yáng)性染色較1

10、2周時(shí)減少，但多于自體移植物組，自體移植物組陽(yáng)性染色較前減少。組織學(xué)和組織化學(xué)變化過(guò)程說(shuō)明異體移植物組塑性改建過(guò)程滯后于自體移植物組。
　　 結(jié)論：本課題采用自體和異體雙股半腱肌腱重建兔ACL，通過(guò)兩種不同移植物重建ACL的組織學(xué)和免疫組織化學(xué)表現(xiàn)，探討了這兩種不同移植物重建ACL對(duì)移植物新生血管的生成情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：正常ACL在組織形態(tài)學(xué)、組織化學(xué)和膠原分布上均表現(xiàn)出其特異性，與一般的肌腱和韌帶組織不同，具有類軟骨特性。關(guān)