成都地區(qū)獻(xiàn)血人群RhD陰性個(gè)體遺傳學(xué)背景研究.pdf

1、目的:
　　 研究成都地區(qū)RhD初篩陰性獻(xiàn)血者中D變異體的存在情況,重點(diǎn)探索Del型這類極弱D的分子遺傳學(xué)背景,以及各種變異D獻(xiàn)血者可能的篩查策略。
　　 方法:
　　 2009年6月-2009年11月之間采集74,947份全血中獲得318份鹽水法初篩陰性標(biāo)本,采用間接抗球蛋白試驗(yàn)(IAT)篩選部分D和弱D,對(duì)IAT陰性的標(biāo)本采用吸收放散試驗(yàn),篩查Del型,采用序列特異性引物PCR(sequence-speici

2、ficprimer-polymerase chain reactions,PCR-SSP)檢測(cè)各種變異D基因型。吸收放散試驗(yàn)陽(yáng)性標(biāo)本采用Del DNA分型試劑盒檢測(cè)Del等位基因,該試劑盒檢測(cè)的Del等位基因包括RHD(M285)、RHD(IVS3+1)、RHD(IVSl+1)、RHD(1227A)、RHD(DELEX9)、RHD(M1I)、RHD(R10W)、RHD(L84P)。對(duì)無(wú)法確定為上述已知Del型的樣本進(jìn)行RHD基因1-7和

3、9-10外顯子測(cè)定,以便了解其外顯子的存在情況。對(duì)檢測(cè)到的弱D15型、RHD(227A)和RHD(M1I)變異D類型進(jìn)行測(cè)序確認(rèn),以及疑難標(biāo)本進(jìn)行測(cè)序分析。
　　 結(jié)果:
　　 318例鹽水法初篩陰性標(biāo)本中檢出3例IAT陽(yáng)性樣本,其中2例是弱D15,1例是部分D(RhDVIⅢ)。成都地區(qū)獻(xiàn)血人群中RhDIAT陰性的比例為0.42％。315例IAT陰性標(biāo)本中ccee表型(56.19％)和Ccee表型(32.06％)比例高。

4、303例IAT陰性標(biāo)本吸收放散試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)71例陽(yáng)性。通過(guò)Del DNA分型試劑盒檢測(cè),檢出57例RHD(1227A)型、1例RHD(M1I)型、13例無(wú)法確定為已知Del型。13例無(wú)法確定為已知Del型的樣本檢測(cè)RHD基因1-7和9-10外顯子,發(fā)現(xiàn)11例樣本大部分或全部缺失上述外顯子、2例含有全部上述外顯子。34例吸收放散實(shí)驗(yàn)陰性且含有C或E抗原的標(biāo)本,經(jīng)檢測(cè)RHD基因1-7和9-10外顯子及1227A,發(fā)現(xiàn)9例RHD(7227A)型

5、、25例部分或全部缺失型。測(cè)序確認(rèn)了弱D15型、RHD(M1I)和RHD(1227A)突變位點(diǎn),對(duì)2例含有所有外顯子的標(biāo)本進(jìn)行1-10外顯子測(cè)序未發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)。通過(guò)血清學(xué)試驗(yàn)和分子生物學(xué)試驗(yàn),我們確定了Del型69例,占IAT篩查RhI)陰性的22.77％(69/303)。
　　 結(jié)論:
　　 成都地區(qū)常規(guī)血清學(xué)篩查RhD陰性獻(xiàn)血人群中存在多種D變異體。其中Del型最多。檢測(cè)到的Del型中,DelRHD(1227G>A)