海豚鏈球菌莢膜相關(guān)基因cpsJ敲除突變株構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究.pdf

1、海豚鏈球菌（Streptococcus iniae，Siniae曾用名Streptococcus shiloi）是一種重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖魚(yú)類病原菌，近年來(lái)由海豚鏈球菌感染導(dǎo)致的魚(yú)類疾病暴發(fā)頻見(jiàn)報(bào)端，為全球水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。莢膜是海豚鏈球菌重要的毒力因子，由多種多糖成分組成。海豚鏈球菌莢膜合成的操縱子由21個(gè)開(kāi)放閱讀框構(gòu)成。cpsJ是莢膜合成操縱子中一個(gè)重要的基因，它編碼一個(gè)尿苷二磷酸葡萄糖(UDP-Glc)差向異構(gòu)酶，參與構(gòu)成莢

2、膜的雜多糖的前體合成。
　　本文利用溫敏載體質(zhì)粒pJRS233對(duì)cpsJ基因進(jìn)行敲除，通過(guò)同源重組將cpsJ基因置換為氯霉素抗性基因，構(gòu)建基因敲除突變株△cpsJ。然后分別對(duì)△cpsJ和野生型海豚鏈球菌進(jìn)行革蘭氏染色并鏡檢、菌落觀察、生長(zhǎng)率測(cè)定、粘附入侵試驗(yàn)、全血?dú)缭囼?yàn)和攻毒試驗(yàn)，對(duì)cpsJ的功能進(jìn)行初步研究。
　　結(jié)果顯示突變株△cpsJ與野生型相比，在同等培養(yǎng)條件下，菌體形成的鏈長(zhǎng)更長(zhǎng);同等培養(yǎng)條件下在THY平板上形成

3、的菌落外觀一致但直徑更小;在生長(zhǎng)率測(cè)定試驗(yàn)中，突變株的生長(zhǎng)曲線到達(dá)平臺(tái)期時(shí)菌液OD600值為0.42，野生型為1.28;在粘附與入侵試驗(yàn)中，突變株對(duì)鯉魚(yú)上皮瘤細(xì)胞(EPC)的粘附率為25.72％，野生型為1.35％;突變株對(duì)EPC的入侵率為1.72％，野生型為0.34％;在全血?dú)缭囼?yàn)中，突變株的存活率為45.94％，野生型為137.39％;在攻毒試驗(yàn)中，腹腔注射突變株菌液的魚(yú)的存活率為75％，注射野生型菌液的魚(yú)的存活率為50％。