農(nóng)桿菌介導(dǎo)的ACO ihpRNAi載體轉(zhuǎn)化亞洲百合的研究.pdf

1、百合是世界著名的切花，在花卉市場(chǎng)中占有重要的地位，但是，百合與其它鮮切花一樣隨著花朵的開放迅速衰老，如何延長(zhǎng)百合花朵的壽命已成為生產(chǎn)與消費(fèi)上急需解決的實(shí)際問題，也是近20年來科學(xué)家研究的主要課題之一。由于常規(guī)雜交育種的局限性和化學(xué)保鮮劑的毒副作用。近年來，生物技術(shù)的發(fā)展，為克服傳統(tǒng)育種的缺陷和化學(xué)保鮮劑使用的毒副作用提供了新觀念、新方法和新手段。本研究是以亞洲百合‘精粹’(Liliumcv ‘elite’)的無菌苗為材料，利用根癌農(nóng)桿菌

2、介導(dǎo)法將從百合中克隆到的ACC氧化酶基因片段采用RNA干擾(RNA interference)技術(shù)導(dǎo)入百合外植體，通過PCR檢測(cè)獲得了陽性表達(dá)植株。研究取得的主要結(jié)果為： 1.鱗片離體再生體系的建立經(jīng)不同培養(yǎng)基篩選，鱗片分化最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0 mg·L<'-1>+NAA 0.2 mg·L<'-1>。 2.遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的建立1)誘導(dǎo)葉片分化率最高的激素組合為MS+TDZ 1.0 mg·L<'-1>+NA

3、A O.2 mg·L<'-1>，再生率達(dá)90.6％： 2)誘導(dǎo)離體小鱗片分化率最高的激素組合為MS+6-BA 2.0 mg·L<'-1>+2，4-D 0.1 mg·L<'-1>，再生率為100％； 3)轉(zhuǎn)化植株生根培養(yǎng)基為MS+NAA 0.2 mg·L<'-1>+0.2％活性炭； 4)卡那霉素篩選壓力的確定：葉片作為轉(zhuǎn)基因的受體材料時(shí)，卡那霉素的亞致死濃度為80 mg L<'-1>：小鱗片作為轉(zhuǎn)基因的受體材料時(shí)，

4、卡那霉素的亞致死濃度為115 mg L<'-1>。 3.遺傳轉(zhuǎn)化 用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)亞洲百合轉(zhuǎn)化過程中，對(duì)預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、根癌農(nóng)桿菌菌液濃度等轉(zhuǎn)化條件進(jìn)行了探索。將百合受體材料在分化培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)3 d，于根癌農(nóng)桿菌菌液濃度(OD=O.8)侵染8～10 min，在含有25 mg·L<'-1>的乙酰丁香酮的培養(yǎng)基上共培養(yǎng)3 d，轉(zhuǎn)移到選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)(其中卡那霉素濃度：葉片為80 mg·L<'-1>，小鱗片為1 15 mg·L～