IBDV超強(qiáng)毒GX8-99株細(xì)胞適應(yīng)毒和回雞毒的致病性、免疫原性及VP5基因的比較.pdf

1、雞傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus，IBDV)引起的青年雞的一種急性、高度接觸性傳染病，主要侵害雞的中樞免疫器官法氏囊，導(dǎo)致免疫抑制和急性死亡。 本課題所用IBDV野毒株GX8/99為本實(shí)驗(yàn)室分離并鑒定，用適當(dāng)劑量病毒接種易感雞，可穩(wěn)定地引起60％-90％的死亡率，是一個(gè)超強(qiáng)毒。為進(jìn)一步研究GX8/9

2、9株的生物學(xué)特性及其變異機(jī)制，利用本實(shí)驗(yàn)室已有的經(jīng)雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)連續(xù)盲傳22代產(chǎn)生細(xì)胞病變后的細(xì)胞適應(yīng)毒，再用無限稀釋法將其克隆傳代。把克隆毒在SPF雞上回傳23代，取得了一系列的GX8/99傳代毒株。為了研究IBDV超強(qiáng)毒GX8/99在傳代過程中的毒力變化及其與VP5基因變異的關(guān)系，分別用GX8/99原始毒、細(xì)胞適應(yīng)毒及回雞毒對(duì)SPF雞做了致病性比較，并比較了其VP5基因序列。 1．超強(qiáng)毒GX8/99細(xì)胞適應(yīng)毒及回雞

3、毒的致病性研究超強(qiáng)毒GX8/99株經(jīng)CEF傳代后對(duì)SPF雞的致死率降至0.5％，被顯著致弱。但細(xì)胞適應(yīng)毒在回傳SPF雞23代后毒力未見明顯增強(qiáng)，表明細(xì)胞致弱毒的毒力較穩(wěn)定。 2．GX8/99原始毒及不同傳代毒在法氏囊中病毒增殖量的比較將同等量的不同傳代毒感染4周齡SPF雞，感染后3d，5d，7d取法氏囊碾磨液進(jìn)行倍比稀釋，然后用IBDV ELISA試紙條(stripe)檢測(cè)其中的IBDV含量，以檢測(cè)到的最大稀釋倍數(shù)作為法氏囊中的

4、病毒量多少的相對(duì)值。與GX8/99原始毒相比，細(xì)胞適應(yīng)毒在法氏囊中的增殖速度要比其原始毒低得多。細(xì)胞適應(yīng)毒在回雞20代后，在法氏囊內(nèi)的增殖速度雖然有所恢復(fù)，但仍比原始毒低。 3．GX8/99細(xì)胞適應(yīng)毒的回雞毒對(duì)SPF雞的致病性和免疫原性三株細(xì)胞克隆毒GXCL2，GXCL4，GXCL5 回雞23代后所得毒株GX-2823，GX-4823，GX-5823，對(duì)4周齡SPF雞的致死率分別為0/15，0/15，1/15。取GX-2823，

5、GX-4823免疫2周齡SPF雞作保護(hù)性實(shí)驗(yàn)，在免疫后3周用超強(qiáng)毒GX8/99攻毒。GX-4823，GX-5823都能造成法氏囊一定程度萎縮，并能顯著降低NDV，AIV(H9-和H5-)疫苗的抗體水平。 但能使機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫力，能完全抵抗超強(qiáng)毒GX8/99的人工感染，保護(hù)率達(dá)100％。 4．IBDV野毒株及超強(qiáng)毒GX8/99傳代毒株VP5基因的比較對(duì)25株不同毒力：IBDV的VP5基因的比較表明其同源性都在97％-100％之

6、間，說明VP5整體比較保守。但有8個(gè)易發(fā)生變異的位點(diǎn)，其中位點(diǎn)bp＃2，＃52，＃145，＃385，＃409的堿基變異引起了相應(yīng)氨基酸的改變，而位點(diǎn)bp＃18，＃232，＃331沒有引起相應(yīng)氨基酸的變化。GX8/99原始毒在細(xì)胞上傳代后在對(duì)雞的致病性減弱的同時(shí)，VP5基因的ORF區(qū)有5個(gè)位點(diǎn)堿基變異并導(dǎo)致編碼氨基酸的變化，特別是ORF的第2個(gè)堿基由T突變?yōu)镃后，使起始密碼子后移了12個(gè)堿基，因而導(dǎo)致細(xì)胞傳代毒的VP5的N端丟失了4個(gè)氨基

7、酸。這種突變與現(xiàn)有的疫苗毒完全一致，但是，對(duì)已發(fā)表的不同的超強(qiáng)毒及強(qiáng)毒株的VP5基因比較表明，一部分超強(qiáng)毒或強(qiáng)毒株IBDV的VP5基因與GX8/99相同，而另一部分超強(qiáng)毒或強(qiáng)毒株IBDV的vP5基因則與GX8/99株的細(xì)胞傳代毒相同。顯然，在超強(qiáng)毒GX8/99在細(xì)胞上連續(xù)傳代過程中VP5基因那5個(gè)位點(diǎn)的突變更可能與適應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)，而與致病性并無直接關(guān)系。 由于超強(qiáng)毒GX8/99細(xì)胞適應(yīng)毒在SPF雞回傳23代后的GX-2823，