米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體的研究.pdf

1、米托蒽醌（mitoxantrone）是一種蒽環(huán)類抗生素，為細胞周期非特異性廣譜抗癌藥，在臨床應用中存在某些較嚴重的不良反應，如心臟毒性。脂質體作為抗腫瘤藥物的載體，具有靶向、減毒、增效的優(yōu)良特性，但是由于米托蒽醌的釋放不易控制，限制了其脂質體制劑的開發(fā)。
　　熱敏脂質體通常用相變溫度稍高于體溫的磷脂來包封藥物，體內給藥后，利用局部加熱的方法觸發(fā)脂質體攜帶的藥物迅速釋放于加熱部位而產生靶向作用。熱敏脂質體加入長循環(huán)材料，在脂質體表面

2、形成親水層和空間位阻，可以避免網狀內皮系統(tǒng)（RES）的吞噬，降低脂質體的血液清除率，從而延長脂質體在循環(huán)系統(tǒng)的滯留時間，增加脂質體的靶向效果。
　　目的：
　　本研究采用米托蒽醌為模型藥物，制備長循環(huán)熱敏脂質體。通過配合熱療增加脂質體藥物在腫瘤區(qū)域的富集并觸發(fā)米托蒽醌迅速釋放,發(fā)揮藥效，從而達到增加靶向性、提高治療指數(shù)的目的。
　　方法：
　　在處方前研究的基礎上初步確定米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體的制備方法：首先制

3、備以檸檬酸為內相的空白脂質體，然后透析置換外相溶液形成跨膜pH梯度，最后將藥物與空白脂質體溶液混合孵育，得到米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體。
　　以包封率和含量為指標，通過單因素試驗優(yōu)化脂質體的制備工藝，考察不同外相溶液、孵育溫度、孵育時間、藥物與磷脂質量比等對脂質體的影響，最終確定米托蒽醌脂質體的最佳處方。
　　對制備得到的米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體進行了質量研究，主要包括外觀、pH值、滲透壓、粒徑分布、包封率和含量等指標的測定。

4、通過體外釋放實驗和細胞實驗驗證脂質體的熱敏特性，并且進行了五個月長期穩(wěn)定性試驗。
　　選用BDFl小鼠作為實驗動物，采用液相色譜-串聯(lián)質譜的方法分別對米托蒽醌溶液和米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體進行體內藥代動力學研究。以BDFl小鼠為實驗動物，考察米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體的毒性。以接種了前列腺癌RM-1細胞的BDFl小鼠為動物模型，對米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體的藥效學進行初步研究，對比了米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體配合不同熱療方式與米托蒽醌游

5、離藥對前列腺癌的治療效果。
　　考察大鼠重復注射米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體是否會產生加快血液清除（accelerated blood clearance，ABC）現(xiàn)象。以Wistar大鼠為實驗動物，采用液相色譜-串聯(lián)質譜的方法測定動物血漿中藥物的含量，考察了米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體在重復給藥后的藥動學變化，并對血樣中的抗PEG的IgM抗體進行ELISA檢測，以揭示其產生藥動學變化的原因。
　　以荷RM-1瘤的BDF1小鼠為實驗

6、動物，簡單研究了米托蒽醌熱敏脂質體配合不同熱療方式后米托蒽醌在肝臟和腫瘤部位的藥物分布情況。
　　結果：
　　通過實驗確定最佳處方為：三種磷脂 DPPC、MSPC、mPEG2000-DSPE的摩爾比為90：10：4，藥物與磷脂的比例為1：10（w/w），內相為0.3 mol/L檸檬酸溶液（pH=4.0），以20 mmol/L組氨酸為透析液，孵育溫度35℃，孵育時間45 min。藥物包封率高，重現(xiàn)性良好。
　　所制備脂質

7、體從體外釋放和細胞水平來分析，均顯示了良好的熱敏特性。體外釋放實驗中米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體在37℃時1 h藥物釋放不足10％，而41℃時1 h幾乎可以釋放全部藥物。細胞實驗中，熱敏脂質體37℃處理45 min后，對細胞抑制不明顯，證明藥物釋放很少；在41℃時，處理10 min和45 min時均顯示了良好的抑制作用，證明藥物在此溫度釋放很快。
　　質量研究結果顯示：
　　三批米托蒽醌脂質體的平均檢測結果如下：pH值為6.53

8、；滲透壓為309 mOsmol/Kg；平均粒徑為100.1 nm；包封率為98.41%；穩(wěn)定性結果顯示：脂質體混懸液在4-8℃條件下存放兩個月，包封率、pH、粒度、含量均無明顯變化，但隨儲存時間延長脂質體的熱敏特性消失。實驗證明熱敏特性的消失是因為米托蒽醌與內水相的檸檬酸溶液存在緩慢的沉積過程。
　　藥動學試驗表明：
　　米托蒽醌游離藥物溶液和脂質體的血漿藥代動力學存在明顯差異，米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體組和游離藥物組的AUC

9、、消除半衰期和清除率分別為5.332μg·h·ml-1、1.294 h、0.719 ml·h-1·g-1和0.583μg·h·ml-1、0.412 h、6.691 ml·h-1·g-1，說明將米托蒽醌制成長循環(huán)熱敏脂質體可以增加藥物在血液中的循環(huán)時間。
　　毒性、藥效學試驗結果表明：
　　米托蒽醌游離藥和長循環(huán)熱敏脂質體的MTD均小于10.2 mg/kg，將米托蒽醌制成熱敏脂質體并未明顯降低其毒性；藥效學實驗中米托蒽醌游離藥

10、與長循環(huán)熱敏脂質體（提前開始熱療）對腫瘤的抑制率分別為27.9%和86.1%。因此米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體可以通過增加抗腫瘤效果來提高藥物的治療指數(shù)。
　　ABC現(xiàn)象的研究結果表明：第一次給藥后AUC為1.905±0.121μg·h·mL-1，CL為1251.291±229.132 mL·h-1·kg-1；第二次給藥后AUC為0.581±0.082μg·h·mL-1，CL為3567.959±374.738 mL·h-1·kg-1；

11、體內抗體檢測證明在第一次靜脈給予米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體后第七天血中抗PEG的IgM抗體水平較高，此時第二次給藥，該抗體則可以與所給脂質體藥物結合，加快藥物清除。結合藥動學和動物體內抗體水平變化證明大鼠重復注射米托蒽醌長循環(huán)熱敏脂質體誘發(fā)了ABC現(xiàn)象。
　　組織分布的結果表明，給藥后不同時間熱療對藥物的分布存在影響，給藥后立刻開始熱療對腫瘤部位藥物的增加更為明顯。
　　結論：
　　以米托蒽醌為模型藥物，制備長循環(huán)熱敏脂