丹參總酚酸長循環(huán)脂質(zhì)體的研究.pdf

1、本文選擇丹參總酚酸為模型藥物，進(jìn)行長循環(huán)脂質(zhì)體的制備，以期解決其穩(wěn)定性差、在血液循環(huán)中滯留時(shí)間短、體內(nèi)作用時(shí)間短等問題，為開發(fā)療效更好、生物利用度更高、服用更方便的丹參新制劑奠定基礎(chǔ)，也為中藥新型給藥系統(tǒng)的制備和評價(jià)提供研究基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。 首先建立了丹參總酚酸和丹酚酸B的體外分析方法。采用高效液相色譜法測定丹酚酸B的含量，用紫外分光光度法測定丹參總酚酸以丹酚酸B計(jì)的含量。采用建立的分析方法考察了丹參總酚酸的穩(wěn)定性及油水分配系數(shù)

2、，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明溫度、光照、pn、超聲對丹參總酚酸含量影響較小，溫度、光照、超聲對丹酚酸B含的含量影響也較小，但pH對丹酚酸B影響較大，堿性條件下丹酚酸B的含量很快降低，pH小于4也會(huì)降低，但降低幅度不及堿性條件。油水分配系數(shù)測定結(jié)果顯示水溶性的丹酚酸B酸性條件下的表觀油水分配系數(shù)會(huì)增大，pH為4.0的表觀油水分配系數(shù)為pH5.3的19.8倍，而pH為2.5的油水分配系數(shù)增至pH 5.3的583倍。 第二部分以mPEG和DSPE為

3、原料合成了PEG-DSPE，并通紅外掃描對其進(jìn)行鑒定，在此基礎(chǔ)上制備長循環(huán)脂質(zhì)體。包封率的測定方法篩選了超速離心法、凝膠柱層析法和超濾法，最后選擇可以較快分離脂質(zhì)體和游離藥物的超濾法。建立了脂質(zhì)體中丹參總酚酸和丹酚酸B的分析方法，選擇乙醇溶解脂質(zhì)體紫外分光光度法測定脂質(zhì)體中總的丹參總酚酸的含量，TritonX-100溶解脂質(zhì)體后HPLC測定脂質(zhì)體中總的丹酚酸B的含量，用超濾法分離脂質(zhì)體和游離藥物后再測定游離藥物的含量，計(jì)算包封率。

4、 篩選了薄膜法、逆相蒸發(fā)法、復(fù)乳法和注入法，選用逆相蒸發(fā)法作為長循環(huán)脂質(zhì)體的制備方法。單因素考察確定以氯仿為有機(jī)溶劑，生理鹽水溶解丹參總酚酸，另外確定成乳用超聲時(shí)間?？疾焖辖橘|(zhì)時(shí)發(fā)現(xiàn)酸性緩沖液水合包封率會(huì)提高，在此基礎(chǔ)上篩選了水合介質(zhì)，甘氨酸．鹽酸緩沖液效果最好，考察了水合介質(zhì)的pH、甘氨酸的濃度對包封率的影響。在單因素考察的基礎(chǔ)上選取對脂質(zhì)體包封率影響較為顯著的3個(gè)因素：膽固醇-磷脂摩爾比，丹參總酚酸．大豆卵磷脂質(zhì)量比和外水相pH

5、為考察對象，運(yùn)用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面優(yōu)化法優(yōu)化長循環(huán)脂質(zhì)體處方，優(yōu)化得到了高包封率、高載藥量、粒徑小的處方，并推廣到普通脂質(zhì)體。考察了脂質(zhì)體和長循環(huán)脂質(zhì)體室溫放置的穩(wěn)定性，脂質(zhì)體和長循環(huán)脂質(zhì)體室溫放置10天后包封率略有降低，故有必要制備其凍干制劑，考察了不同凍干保護(hù)劑不同濃度對長循環(huán)脂質(zhì)體的保護(hù)作用，最后選擇以10％蔗糖為凍干保護(hù)劑。將脂質(zhì)體和長循環(huán)脂質(zhì)體采用冷凍干燥法制備成凍干品后考察其穩(wěn)定性，于4℃放置3個(gè)月包封率、含量和粒徑無明顯變化

6、。另外測定了脂質(zhì)體的粒徑，透射電鏡觀察了脂質(zhì)體的形態(tài)，凍干前后無變化。運(yùn)用巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)考察PEG-DSPE占磷脂2％，5％和10％摩爾比例的長循環(huán)脂質(zhì)體減少巨噬細(xì)胞吞噬的效果，結(jié)果顯示占磷脂5％摩爾比例的長循環(huán)脂質(zhì)體減少巨噬細(xì)胞吞噬的效果最好。透析法考察了脂質(zhì)體及長循環(huán)脂質(zhì)體的體外釋放情況，脂質(zhì)體和長循環(huán)脂質(zhì)體有延緩藥物釋放的作用，加入血漿后脂質(zhì)體釋放加快，而長循環(huán)脂質(zhì)體釋放受血漿影響較小。 通過對丹參總酚酸脂質(zhì)體、長循環(huán)脂

7、質(zhì)體和溶液靜脈注射后大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)和小鼠體內(nèi)組織分布的研究，以考察丹參總酚酸長循環(huán)脂質(zhì)體的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)特性。建立了大鼠血漿中丹酚酸B的含量測定方法，方法學(xué)考察結(jié)果滿足測定要求。3p87軟件擬合結(jié)果表明溶液組、脂質(zhì)體組和長循環(huán)脂質(zhì)體組均符合二室模型，脂質(zhì)體的t<,1/2β>為溶液組的5.7倍，長循環(huán)脂質(zhì)體的t<,1/2β>為溶液組的17.5倍，脂質(zhì)體的AUC(0～T)和AAUC(0～∞)分別為溶液組的6.7，6.8倍，長循環(huán)脂質(zhì)體的AUC(

8、0～T)和AUC(0～∞)分別為溶液組的13，14.5倍，脂質(zhì)體和長循環(huán)的優(yōu)勢也體現(xiàn)在MRT參數(shù)上，脂質(zhì)體的MRT(0～∞)為溶液的8.2倍，長循環(huán)的MRT(0～∞)為溶液的35.6倍。藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分表明脂質(zhì)體和長循環(huán)脂質(zhì)體可以顯著延長SalB的體內(nèi)循環(huán)時(shí)間，提高丹參酚酸的生物利用度，長循環(huán)脂質(zhì)體的效果優(yōu)于脂質(zhì)體。小鼠體內(nèi)組織分布的研究結(jié)果顯示脂質(zhì)體和長循環(huán)脂質(zhì)體均可以增強(qiáng)丹參總酚酸在各個(gè)臟器中的分布，注射短期內(nèi)脂質(zhì)體在各個(gè)臟器中分

9、布較長循環(huán)脂質(zhì)體多，隨著時(shí)間延長，長循環(huán)脂質(zhì)體的分布開始高于脂質(zhì)體。 進(jìn)一步考察了脂質(zhì)體和長循環(huán)脂質(zhì)體在大動(dòng)物體內(nèi)的代謝消除情況，選用Beagle犬為受試對象，進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)的研究，同時(shí)進(jìn)行全血粘度的測量，初步考察將丹參總酚酸載入脂質(zhì)體和長循環(huán)脂質(zhì)體后藥效學(xué)的改善。首先建立并評價(jià)了測定丹參酚酸B在。Beagle犬血漿中的高效液相色譜方法，方法學(xué)考察結(jié)果滿足測定要求。 3p87軟件擬合結(jié)果表明脂質(zhì)體和長循環(huán)脂質(zhì)體也可以顯著延長

10、丹參酚酸B的在Beagle犬體內(nèi)的半衰期，提高血漿中藥物濃度，長循環(huán)脂質(zhì)體效果優(yōu)于脂質(zhì)體。以全血粘度作為藥效學(xué)指標(biāo)，結(jié)果表明丹參總酚酸降低血液粘度的效果較明顯。三種劑型注射后Beagle犬血液粘度降低趨勢不同，溶液組的血液粘度降低較迅速，降低幅度較大，但2小時(shí)后粘度又有升高，之后又再次降低。脂質(zhì)體組和長循環(huán)脂質(zhì)體組降低血液粘度的時(shí)間較長，給藥后10小時(shí)脂質(zhì)體組和長循環(huán)脂質(zhì)體組的血液粘度仍處于降低狀態(tài)。2-6小時(shí)內(nèi)脂質(zhì)體組的粘度降低幅度比