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文檔簡介
1、目的通過建立體外病毒性心肌炎(VMC)細胞模型,研究廣棗總黃酮(TFCA)的體外抗柯薩奇B組3型病毒(CVB3)作用及其作用機制,探究其作用靶點,為TFCA進一步開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。方法采用差速貼壁法培養(yǎng)原代乳鼠心肌細胞,鏡下觀察心肌細胞搏動次數(shù),使用α-actin免疫組化法鑒定培養(yǎng)心肌細胞的純度;在細胞水平測定陽性藥鹽酸胍以及廣棗總黃酮的藥物毒性;以CVB3感染心肌細胞建立病毒性心肌炎細胞模型;MTT染色分析廣棗總黃酮對病毒感染后的He
2、la細胞及心肌細胞是否有保護作用;病毒繁殖抑制實驗比較不同分組間TCID50的差別以驗證廣棗總黃酮在Hela細胞及心肌細胞上的抗病毒活性;測定各實驗組心肌細胞培養(yǎng)上清液中心肌酶LDH、CK-MB的變化;測定各實驗組心肌細胞培養(yǎng)上清液中腫瘤壞死因子TNF-α含量的變化;運用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)測定心肌細胞內(nèi)病毒相關(guān)基因的表達。結(jié)果經(jīng)過在Hela細胞及心肌細胞水平的初篩,確定廣棗總黃酮具有保護心肌細胞免受CVB3病毒侵襲的作用。病毒繁殖抑制
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