C8-神經(jīng)酰胺誘導肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡的研究.pdf

1、目的：探討外源性C8-神經(jīng)酰胺（C8-ceramide）對肺泡Ⅱ型上皮細胞體外生存率的影響，以及C8-神經(jīng)酰胺對肺泡Ⅱ型上皮細胞的誘導凋亡作用。
　　方法：取妊娠18天的 ICR孕鼠一只，分離、培養(yǎng)原代胎鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞（alveolar type II epithelial cell，AECⅡ），使用免疫細胞化學鑒定法和透射電子顯微鏡對所獲取的細胞進行鑒定。分別加入0、20、40、80μmol/L的C8-神經(jīng)酰胺溶液，繼續(xù)培養(yǎng)

2、24 h，使用MTT法檢測外源性C8-神經(jīng)酰胺對AECⅡ增殖的影響，然后使用80μmol/L C8-神經(jīng)酰胺溶液分別培養(yǎng)AECⅡ3、6、12、24 h，MTT法檢測AECⅡ活力，并計算體外細胞生存率的變化。使用0、20、40、80μmol/L C8-神經(jīng)酰胺溶液對AECⅡ進行體外干預，于12 h和24 h后，分別使用流式細胞術和TUNEL法檢測各組細胞的凋亡率。
　　結果：細胞鑒定結果證明，通過本實驗提取的細胞為胎鼠肺泡Ⅱ型上皮細

3、胞，具有肺泡Ⅱ型上皮細胞的特征性結構。MTT結果提示，C8-神經(jīng)酰胺對 AECⅡ增殖具有明顯抑制作用，并且具有濃度效應和時間效應。碘化丙啶染色法結果顯示，C8-神經(jīng)酰胺溶液濃度為0、20、40、80μmol/L時，12 h和24 h細胞總凋亡率分別為：(5.80±0.30)％、(7.00±0.10)%、(9.97±0.50)%、(12.67±0.67)%和(5.67±1.39)%、(8.87±0.49)%、(13.97±1.33)%、(

4、18.80±0.46)%，各劑量組凋亡率與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義，且隨著藥物濃度的上升和時間的延長，細胞凋亡率呈上升趨勢。AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法實驗結果提示，C8-神經(jīng)酰胺溶液濃度為0、20、40、80μmol/L時，12 h和24 h細胞總凋亡率分別為：(20.63±0.86)%、(22.67±1.72)%、(42.03±1.34)%、(50.40±1.30)%和(20.93±2.51)%、(28.93±3.19

5、)%、(47.00±1.08)%、(57.77±3.04)%（除12小時20μmol/L組外，相同時間點，其他各組與對照組相比，差異均有統(tǒng)計學意義，均 P＜0.05）。TUNEL法提示，C8-神經(jīng)酰胺溶液濃度為0、20、40、80μmol/L時，12 h和24 h的凋亡率分別為：(5.51±1.41)%、(13.24±2.62)%、(35.10±4.59)%、(75.07±4.37)%和(5.56±1.36)%、(21.34±2.09)