人呼吸道甲型流感病毒受體的分布和感染H5N1流感病毒的病理變化.pdf

1、1．背景和目的：
　　 2003年12月至今，H5N1禽流感相繼在歐亞和非洲爆發(fā)，令人震驚的是到目前為止，WHO證實(shí)已造成335人感染，有引起世界性大流感的趨勢(shì)。目前， H5N1病毒如何跨種屬障礙感染人的分子機(jī)制仍未完全清楚。禽流感病毒在人感染率極低，同樣人流感病毒很難在水禽類復(fù)制，其主要原因?yàn)槭荏w結(jié)合特異性限制，流感病毒通過(guò)其表面HA與宿主細(xì)胞唾液酸受體特異性結(jié)合而感染宿主，絕大多數(shù)禽流感病毒與唾液酸α-2,3Gal受體結(jié)合，

2、而人流感病毒與唾液酸α-2,6Gal受體結(jié)合，相應(yīng)的禽類和人分別表達(dá)唾液酸α-2,3Gal受體和唾液酸α-2,6Gal受體為主。這種受體類型和分布不同被認(rèn)為流感病毒在禽類和人之間跨種屬傳遞的主要障礙。本研究目的是探討人呼吸道各年齡組各部位流感病毒受體的分布規(guī)律、為H5N1病毒直接感染人提供理論依據(jù)以及禽流感病毒H5N1感染人的病理學(xué)特點(diǎn)和組織嗜性。
　　 2．方法：
　　 2.1 親和組織化學(xué)法檢測(cè)人呼吸道唾液酸α-2,

3、3Gal和α-2,6Gal受體的表達(dá)。
　　 2.2人呼吸道組織的流感病毒體外感染。
　　 2.3應(yīng)用免疫組織化學(xué)法，檢測(cè)和觀察人感染高致病禽流感病毒尸體解剖全身各組織器官和人呼吸道組織體外感染流感病毒后病毒抗原的分布。
　　 2.4 免疫組化-免疫熒光雙染法：免疫組化法單克隆抗體抗SP-A、CD68分別標(biāo)記II型肺泡細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，免疫熒光染色法抗流感病毒NP單克隆抗體標(biāo)記流感病毒蛋白NP。
　　 2.

4、5 采用普通光學(xué)顯微鏡觀察法，對(duì)1例人感染高致病禽流感病毒H5N1的系統(tǒng)尸體解剖病例組織標(biāo)本進(jìn)行病理學(xué)觀察。
　　 3．結(jié)果：
　　 3.1人呼吸道流感病毒受體的分布，唾液酸α-2,6Gal受體在氣管、支氣管呈高密度分布，隨著支氣管分級(jí)逐漸降低分布減少，至肺泡分布最少；而唾液酸α-2,3Gal受體以呼吸部即呼吸細(xì)支氣管和肺泡為主，氣管、支氣管和細(xì)支氣管少量分布。
　　 3.2胎兒、嬰幼兒、兒童青少年和成年人呼吸道

5、唾液酸α-2,3Gal和α-2,6Gal受體的表達(dá)無(wú)顯著性差異。
　　 3.3 14例人標(biāo)本，呼吸細(xì)支氣管上皮細(xì)胞、肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞、肺巨噬細(xì)胞均被10株H5N1病毒感染，10株病毒感染無(wú)明顯差異，而支氣管至終末細(xì)支氣管上皮細(xì)胞僅個(gè)別細(xì)胞感染，氣管上皮細(xì)胞無(wú)感染。
　　 3.4 人感染高致病禽流感H5N1病毒各組織器官的病理特點(diǎn)：脫屑性氣管支氣管炎，肺臟彌漫性肺泡上皮損傷和/或壞死、肺泡間隔淋巴漿細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維化。肺外器

6、官：腎小管局灶壞死，骨髓細(xì)胞少量細(xì)胞壞死，中樞神經(jīng)系統(tǒng)少量細(xì)胞變性、壞死，脾臟白髓萎縮、紅髓充血，肝細(xì)胞脂肪變性，胰腺外分泌部部分腺泡上皮壞死。
　　 3.5 H5N1病毒在各組織器官的分布：肺泡的II型肺泡細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，腎小球系膜細(xì)胞，胰腺外分泌部腺泡上皮細(xì)胞和骨髓細(xì)胞、巨噬細(xì)胞流感病毒NP均呈陽(yáng)性表達(dá)，顯示出這些細(xì)胞為H5N1病毒主要攻擊對(duì)象。其它胃腸道粘膜腺上皮、腎小管上皮細(xì)胞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞、扁桃體巨噬細(xì)胞、氣管和支

7、氣管上皮細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞和脾臟的巨噬細(xì)胞少量陽(yáng)性表達(dá)。
　　 4．結(jié)論：
　　 4.1人呼吸道上皮細(xì)胞均有流感病毒唾液酸α-2,6Gal和α-2,3Gal受體的分布，以唾液酸α-2,6Gal受體分布為主。氣管、支氣管唾液酸α-2,6Gal受體呈高密度分布，隨著支氣管分級(jí)逐漸降低分布減少，至肺泡分布最少，而唾液酸α-2,3Gal受體以呼吸部即呼吸細(xì)支氣管和肺泡為主，氣管、支氣管和細(xì)支氣管僅少量分布。同時(shí)，人呼吸道

8、發(fā)育成熟過(guò)程中，唾液酸α-2,3Gal和α-2,6Gal受體的表達(dá)無(wú)明顯變化。
　　 4.2 呼吸道組織對(duì)H5N1病毒敏感，呼吸細(xì)支氣管上皮、肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞是其攻擊的主要靶細(xì)胞，細(xì)支氣管、支氣管和氣管少量上皮也可感染，支持唾液酸α-2,3Gal受體分布特點(diǎn)。
　　 4.3 人氣管至肺泡細(xì)胞同時(shí)表達(dá)肺泡唾液酸α-2,6Gal受體和α-2,3Gal受體,同時(shí)感染人和禽流感病毒。提示人也是重要流感病毒“基因混合