硒蛋白S在缺血性腦卒中大鼠腦組織的表達(dá).pdf

1、目的:
　　 腦卒中已繼心臟病和癌癥成為人類第三大死亡原因，也是全球成人致殘的主要原因之一。近幾年關(guān)于缺血性腦卒中的研究已逐漸發(fā)現(xiàn)炎癥反應(yīng)對卒中后腦組織損傷具有重要影響，腦缺血后持續(xù)發(fā)展的炎癥可加重缺血損傷，所以抗炎治療的研究逐漸受到重視并廣泛開展。硒蛋白S是一種定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的抗炎因子，正是通過調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)促進(jìn)細(xì)胞存活的，有實(shí)驗(yàn)證實(shí)體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞受到缺血損害時，硒蛋白S的表達(dá)增加，并且可以減輕星形膠質(zhì)的缺血損傷，另有一份

2、芬蘭的研究報道表明硒蛋白S基因位點(diǎn)變異則會增加人群出現(xiàn)缺血性腦梗塞的危險性，這兩點(diǎn)說明硒蛋白S可以保護(hù)缺血腦組織。然而，硒蛋白S在缺血性卒中后的腦組織中的表達(dá)情況一直未有報道，本實(shí)驗(yàn)擬利用線栓法阻塞大鼠大腦中動脈血流1小時，制作大鼠短暫性局灶性腦缺血模型，研究從缺血再灌注后3小時到7天期間硒蛋白S在腦組織中的表達(dá)情況。
　　 方法:
　　 健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠，體重250g-300g，隨機(jī)分為7組

3、:假手術(shù)組、腦缺血再灌注后3h、6h、12h、24h、3d、7d組（每組18只），缺血性腦卒中模型采用線栓法阻塞大腦中動脈(MCAO)，1小時后拔出栓線恢復(fù)灌注;假手術(shù)組手術(shù)過程除不用栓線阻塞大腦中動脈，余手術(shù)過程同缺血再灌注組。缺血再灌注組于手術(shù)后各相應(yīng)時間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分，然后取腦，并與假手術(shù)組比較。每組隨機(jī)取6只大鼠快速取腦行2mm厚度冠狀切片進(jìn)行TTC染色;每組隨機(jī)取6只大鼠灌心取腦，比較梗塞側(cè)較對側(cè)體積變化情況，然后甲醛

4、固定，石蠟包埋，制作石蠟切片，備尼氏染色、HE染色和免疫組化實(shí)驗(yàn)時使用;每組剩下6只大鼠快速取腦，在每只大鼠大腦取三個部位取等量腦組織（缺血對側(cè)腦組織、梗塞中心處、缺血半暗帶）進(jìn)行western-blot實(shí)驗(yàn)。整個過程運(yùn)用神經(jīng)功能缺損評分、梗塞后腦組織體積變化、TTC染色和HE染色確定線栓法制作腦梗塞模型的成功性和并確定梗塞部位，運(yùn)用尼氏染色、免疫組化和westernblot檢測缺血后腦組織神經(jīng)元損傷情況、星形膠質(zhì)細(xì)胞活動情況及SelS

5、在不同部位、時間點(diǎn)表達(dá)變化及參與腦梗塞發(fā)生的可能機(jī)制。進(jìn)行數(shù)據(jù)整理分析，得出SelS表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.行為學(xué)觀察:大鼠腦缺血再灌注后神經(jīng)功能缺損癥狀較假手術(shù)組明顯(p＜0.05)，表現(xiàn)為行動遲緩，行走時拖步，并向左側(cè)傾倒、轉(zhuǎn)圈，約76.1％手術(shù)大鼠于缺血再灌注后24h神經(jīng)功能缺損癥狀達(dá)高峰，根據(jù)ZeaLonga評分，缺血再灌注后3h神經(jīng)功能缺損評分達(dá)2-3分者方可用于實(shí)驗(yàn)。
　　 2.腦組織缺血

6、損傷:TTC染色示線栓法阻塞大腦中動脈的腦缺血損傷主要引起同側(cè)半球大腦中動脈供應(yīng)的運(yùn)動感覺皮質(zhì)區(qū)和紋狀體區(qū)組織梗死，將該側(cè)腦組織分為梗塞中心區(qū)和梗塞周圍區(qū);缺血再灌注后24h的腦組織梗塞側(cè)表面積增大，而3d和7d的腦組織梗塞側(cè)表面積減少，7d時更明顯;梗塞中心可見細(xì)胞腫脹、萎縮，周邊殘留空穴，缺血半暗帶區(qū)則正常細(xì)胞和缺血損傷細(xì)胞并存;梗死中心可見神經(jīng)元在缺血再灌注后12h數(shù)量明顯減少，星形膠質(zhì)細(xì)胞在3d時開始出現(xiàn)明顯減少(p＜0.05)

7、，7d時更明顯(p＜0.01)，在缺血半暗帶區(qū)，神經(jīng)元于再灌注后3d逐漸減少(p＜0.05)，星形膠質(zhì)細(xì)胞則于3d時開始出現(xiàn)明顯增加(p＜0.05)。
　　 3.免疫組化示SelS在梗塞中心區(qū)于再灌注后3d表達(dá)量逐漸減少，與假手術(shù)組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05);在缺血半暗帶區(qū)，SelS于再灌注后3d表達(dá)量逐漸增加，與假手術(shù)組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 4.免疫蛋白印記示SelS的在梗塞中心區(qū)與缺

8、血半暗帶的表達(dá)與GFAP的表達(dá)趨勢一致。
　　 結(jié)論:
　　 1.線栓法制作大腦中動脈阻塞的缺血性腦卒中模型技術(shù)成熟，腦梗塞部位固定可靠，梗塞中心區(qū)神經(jīng)細(xì)胞逐漸壞死消失，缺血半暗帶出現(xiàn)膠質(zhì)細(xì)胞增生。
　　 2.SelS在缺血性腦卒中的腦組織缺血半暗帶區(qū)表達(dá)量增高。
　　 3.SelS在缺血中心和缺血半暗帶的表達(dá)與GFAP的表達(dá)模式一致，SelS抗炎作用可能是星形膠質(zhì)細(xì)胞抗炎的一種機(jī)制。
　　 4.