BMSCs移植對(duì)缺血性腦卒中大鼠IL-1β、TNF-α表達(dá)的影響.pdf

1、目的
　　骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem ceIIs,BMSCs）移植治療大腦中動(dòng)脈阻塞(Middle Cerebral Artery Occlusion，MCAO)模型鼠后，在不同時(shí)間點(diǎn)采用western blot、ELISA方法檢測(cè)IL-1β、TNF-α的表達(dá)變化，分析BMSCs移植對(duì)缺血性腦卒中后炎性因子的影響，探討B(tài)MSCs移植治療缺血性腦卒中修復(fù)受損神經(jīng)功能的可能抗炎機(jī)制。

2、r>　　方法
　　取幼年雄性SD大鼠骨髓腔細(xì)胞，通過全骨髓培養(yǎng)法和細(xì)胞貼壁培養(yǎng)法體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增得到BMSCs，傳至第4代，免疫熒光法鑒定，誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞及神經(jīng)干細(xì)胞并鑒定。取成年雄性SD大鼠，用Longa線栓法制造MCAO模型。參考Bederson JB評(píng)分法測(cè)評(píng)大鼠神經(jīng)功能缺損，篩選入組MCAO模型鼠；TTC染色法顯示腦組織梗死范圍，剔除TTC（-）或有出血的大鼠樣本。
　　取造模成功的MCAO模型鼠完

3、全隨機(jī)分為2組：A組/MCAO模型組（n=16），即建立MCAO模型后注射1ml生理鹽水；B組/實(shí)驗(yàn)組（n=16），即建立MCAO模型后通過尾靜脈注射法移植1ml2×l09/L BMSCs；A、B組各分為處理后1d、3d、7d、14d時(shí)間點(diǎn)亞組（n=4）。取正常大鼠設(shè)C組/空白組（n=4），不予任何干預(yù)。各亞組行心臟取血，ELISA方法檢測(cè)大鼠血清IL-1β、TNF-α的表達(dá)變化；生理鹽水灌注取腦，western blot方法檢測(cè)大鼠腦

4、組織IL-1β、TNF-α的表達(dá)變化。
　　結(jié)果
　　1.成功培養(yǎng)得到BMSCs。鏡下細(xì)胞形態(tài)：原代BMSCs呈圓形或類圓形，貼壁數(shù)量少；經(jīng)過純化、擴(kuò)增，貼壁細(xì)胞增多，呈長(zhǎng)梭形，集落樣生長(zhǎng)，局部呈漩渦狀；至P7代，細(xì)胞逐漸老化，以扁平細(xì)胞為主。細(xì)胞免疫熒光法鑒定：CD54（+）、CD34（-），符合BMSC免疫表型特點(diǎn)。BMSCs誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞見細(xì)小顆粒于培養(yǎng)液；誘導(dǎo)為脂肪細(xì)胞見紅色脂滴于胞漿；誘導(dǎo)為神經(jīng)干細(xì)胞見棕色顆粒于胞

5、漿。
　　2.大鼠神經(jīng)功能評(píng)分：造模后1天實(shí)驗(yàn)組評(píng)分較模型組無明顯差異（P>0.05），3天、7天、14天實(shí)驗(yàn)組較模型組均有下降（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.大鼠血清IL-1β、TNF-α表達(dá)（單位：ng/L）：1天、3天、7天、14天各亞組：IL-1β濃度為模型組27.0±0.35、29.2±0.60、25.2±0.65、22.8±0.66，實(shí)驗(yàn)組25.2±0.31、26.8±0.56、20.8±0.39、

6、19.2±0.94，空白組10.9±0.54；TNF-α濃度為模型組231±1.46、225±4.98、216±4.16、198±4.61，實(shí)驗(yàn)組189±2.85、178±3.17、166±5.27、157±6.03，空白組146±6.86；模型組較空白組均明顯增多（P<0.05），實(shí)驗(yàn)組較模型組均減少（P<0.05），但較空白組仍增多（P<0.05）。模型組及實(shí)驗(yàn)組與空白組比較：IL-1β表達(dá)1天增多，3天達(dá)高峰，7天下降，14天持續(xù)

7、下降，但仍高于空白組（P<0.05）；TNF-α表達(dá)1天增多達(dá)高峰，3天下降，7天、14天緩慢下降，但仍高于空白組（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.大鼠腦組織IL-1β、TNF-α表達(dá)（灰度值）：1天、3天、7天、14天各亞組：IL-1β為模型組5502±108.9、6267±160.5、4425±158.1、3352±187.1，實(shí)驗(yàn)組4217±143.7、4706±111.8、3235±150.7、2307±120

8、.7，空白組1874±70.7；TNF-α為模型組7801±148.9、6296±170.7、5399±240.9、3458±180.2；實(shí)驗(yàn)組6468±180.9、5789±119.7、4647±207.3、2828±152.6，空白組2215±159.5；模型組較空白組均增高（P<0.05），實(shí)驗(yàn)組較模型組均降低（P<0.05）較空白組增高（P<0.05）。模型組及實(shí)驗(yàn)組與空白組比較：IL-1β表達(dá)1天增高，3天達(dá)高峰，7天下降，1