褪黑素對(duì)大鼠脊髓損傷后TNF-α、IL-1β表達(dá)的影響.pdf

1、背景和目的:
　　脊髓損傷(spinalcordinjury，SCI)是由各種原因?qū)е碌纳窠?jīng)系統(tǒng)的損傷，往往導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)及感覺(jué)出現(xiàn)嚴(yán)重的功能障礙。脊髓損傷包括原發(fā)性損傷及由原發(fā)性因素導(dǎo)致的繼發(fā)性損傷。原發(fā)性損傷是個(gè)瞬間發(fā)生的過(guò)程，具有不可逆轉(zhuǎn)的特點(diǎn)。而繼發(fā)性損傷是在原發(fā)性損傷的基礎(chǔ)上發(fā)生的，其過(guò)程具有可逆轉(zhuǎn)的特點(diǎn)。脊髓損傷后大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及大量炎癥因子的產(chǎn)生是導(dǎo)致脊髓繼發(fā)性損傷的主要因素。由于脊髓的繼發(fā)性損傷能夠被逆轉(zhuǎn)，因此，關(guān)于

2、研究的治療脊髓損傷的焦點(diǎn)在于減輕脊髓的繼發(fā)性損傷，控制繼發(fā)性損傷是SCI早期治療的重要目標(biāo)之一。褪黑素(melatonin，MT)是一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素，其由松果體分泌的，具有調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、抗炎等多種生物學(xué)功能，前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明其能夠促進(jìn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(NGF)的分泌作用，但其對(duì)脊髓損傷后炎癥因子TNF-α及IL-1β的作用尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察褪黑素對(duì)脊髓損傷后不同時(shí)期炎癥因子TNF-α、IL-1β表達(dá)的影響，研究MT對(duì)SCI繼發(fā)性

3、損傷的作用，進(jìn)一步明確MT對(duì)SCI保護(hù)機(jī)制。
　　研究對(duì)象和方法:
　　108只SD大鼠隨機(jī)分為3組:假手術(shù)（Sham）組、脊髓損傷(SCI)組、脊髓損傷+褪黑素(SCI+MT)組。每組36只。Sham組僅行椎板切除不損傷脊髓，SCI組與SCI+MT組采用改良的Allen's法(打擊量50gcf)建立T12脊髓損傷模型。SCI+MT組術(shù)后10min腹腔注射褪黑素(100mg/kg)，SCI組注射等體積5％乙醇。術(shù)后1h、12

4、h、24h、48h及72h對(duì)3組大鼠行神經(jīng)功能評(píng)分，3組大鼠采用ELISA方法檢測(cè)脊髓損傷后血清中TNF-α、IL-1β的表達(dá)水平，RT-PCR法測(cè)定脊髓組織TNF-αmRNA的表達(dá)情況，免疫組化法觀察損傷后12h脊髓組織TNF-α蛋白的表達(dá)，HE染色法觀察組織的病理變化。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，各組之間的數(shù)據(jù)采用單因素方差分析。各組組間比較當(dāng)方差齊時(shí)采用t檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)，采用Tamhane'sT2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)取α

5、=0.05。
　　結(jié)果:
　　1.SCI組1h后TNF-α表達(dá)明顯增加，12h達(dá)高峰，之后表達(dá)開(kāi)始下降，72h接近Sham組水平，但仍高于Sham組。SCI+MT組TNF-α表達(dá)水平于各個(gè)時(shí)間點(diǎn)較SCI組明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。3組表達(dá)高低順序依次為SCI組、SCI+MT組、Sham組;血清中IL-1β的表達(dá)與TNF-α變化趨勢(shì)一致。
　　2.脊髓組織中TNF-αmRNA含量1h后表達(dá)明顯增加，12

6、h達(dá)高峰，后開(kāi)始下降，高表達(dá)至24h，72h接近Sham組但仍高于Sham組水平，且各個(gè)時(shí)間點(diǎn)表達(dá)的高低順序?yàn)镾CI組、SCI+MT組、Sham組，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.脊髓組織病理學(xué)結(jié)果:SCI+MT組于各個(gè)時(shí)間點(diǎn)病理改變均較SCI組輕。且TNF-α蛋白的含量高低順序依次為SCI組、SCI+MT組、Sham組。由此可以看出，MT具有減輕繼發(fā)性損傷的作用。
　　4.各組術(shù)后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)BBB評(píng)分顯示