毛皮動(dòng)物犬瘟熱的流行情況及一株犬瘟熱病毒的生物學(xué)特性研究.pdf

1、犬瘟熱(Canine distemper,CD)是由犬瘟熱病毒(Canine distemper virus，CDV)引起的一種以發(fā)熱、胃腸炎、過(guò)度角質(zhì)化、神經(jīng)癥狀等為特征的高度接觸性傳染病。2013年8月-2014年8月，山東省部分地區(qū)毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)暴發(fā)了CD，給養(yǎng)殖戶帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為了解山東省部分地區(qū)毛皮動(dòng)物犬瘟熱流行情況，揭示CDV的流行和遺傳變異規(guī)律，為預(yù)防和控制CD提供更全面的理論依據(jù)，本研究進(jìn)行了以下幾方面的工作:<

2、br>　　1.對(duì)山東省諸城、青島、文登、榮成、臨沂、臨朐、煙臺(tái)、聊城、泰安、萊蕪等10個(gè)城市的25個(gè)規(guī)模化毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)送檢的665份臨床病例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并分析CD在季節(jié)分布上的差異、與其他細(xì)菌混合感染情況及諸城市100份出欄水貂血清犬瘟熱抗體（CDV-Ab）情況。結(jié)果顯示，犬瘟熱陽(yáng)性檢出率為22.6％(150/665)。其中，犬瘟熱單獨(dú)感染陽(yáng)性率為46.7％(70/150)，犬瘟熱與細(xì)菌性疾病混合感染占陽(yáng)性病例的53.3％(80/150)

3、，尤其是與綠膿桿菌混合感染率高達(dá)31.3％(25/80);對(duì)諸城市出欄水貂血清犬瘟熱抗體檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)犬瘟熱抗體平均陽(yáng)性率為35％，且免疫次數(shù)的多少與犬瘟熱抗體陽(yáng)性率呈正相關(guān)。
　　2.對(duì)篩選出的6株CDV陽(yáng)性樣本的血凝素基因（HA）進(jìn)行了全基因序列測(cè)定及遺傳變異分析。序列分析結(jié)果表明，6個(gè)山東分離株HA基因的閱讀框全長(zhǎng)均為1824bp，編碼607個(gè)氨基酸(aa)，未發(fā)現(xiàn)堿基的插入和缺失。分離株間核苷酸(98.7％-99.5％)及氨

4、基酸(97.9％-99.2％)同源性較高，而與CDV疫苗株間核苷酸(89.8％-90.6％)和氨基酸(88.2％-90.4％)同源性均較低。6個(gè)山東CDV分離株與分離自遼寧省的水貂株LN(13)2和SD(12)1以及貉源株SD(13)1共同歸屬于亞洲-1(Asia-1)型，而與CDV疫苗株遺傳距離較遠(yuǎn)。其中，SD(13)9株含有10個(gè)潛在N-連接糖基化位點(diǎn)(N-X-S/T)，其他5個(gè)山東分離株均有9個(gè)且456-458位N-X-S/T缺失

5、，而疫苗株含有4個(gè)或7個(gè)，6個(gè)山東分離株均在542-544位出現(xiàn)一個(gè)新的N-X-S/T。6株山東CDV分離株HA蛋白530位氨基酸位點(diǎn)均為甘氨酸(G)，549位氨基酸位點(diǎn)出現(xiàn)酪氨酸(Y)到組氨酸(H)的替換。
　　3.通過(guò)細(xì)胞傳代分離得到一株適應(yīng)VERO細(xì)胞的CDV毒株ZC株，并對(duì)其進(jìn)行了全基因序列測(cè)定與分析。序列分析結(jié)果表明，CDV-ZC株全基因組共包含15690nt，GenBank登錄號(hào)為KJ994343，該基因組推導(dǎo)的某些氨

6、基酸位點(diǎn)發(fā)生了突變，CDV-ZC株與其他毒株的核苷酸同源性為91.6％-97.8％，與CDV PS株同源性高達(dá)97.8％;與Onderstepoort株同源性最低(91.6％)。基于HA基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)與全基因分析結(jié)果一致，基于全基因序列繪制的系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)表明，所有CDV分離株分為疫苗株和野毒株2支，CDV-ZC株和PS株位于同一支且親緣關(guān)系最近，歸屬于Asia-1型。HA基因的限制性片段多態(tài)性分析(RFLP)表明CDV-ZC株為野毒