沉默二肽基肽酶IV-CD26對上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞侵襲及增殖的影響.pdf

1、背景及意義:
　　在女性常見的所有生殖器官惡性腫瘤中，卵巢癌是致死率最高的，其發(fā)病率逐年攀升。而在所有卵巢惡性腫瘤中，上皮性卵巢癌(Epithelialovariancancer,EOC)是發(fā)病率最高的，且其預(yù)后相對較差。卵巢癌起病隱匿，大多數(shù)患者在臨床上被發(fā)現(xiàn)時已處于晚期，且均伴有不同程度的轉(zhuǎn)移，腫瘤細(xì)胞減滅手術(shù)難以徹底根治，即使術(shù)后多方面輔助治療仍避免不了復(fù)發(fā)可能。至今在治療及預(yù)后方面遠遠達不到人們期望的效果。有報道稱持續(xù)的生

2、長信號刺激，無限的復(fù)制潛能，增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的激活等是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞惡性行為的根本原因。探索卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的分子機制，為卵巢癌的治療尋找新的生物靶點是廣大婦產(chǎn)科醫(yī)生關(guān)注的熱點。
　　腫瘤轉(zhuǎn)移是腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)灶組織后通過血管或淋巴系統(tǒng)，轉(zhuǎn)移到其他組織或器官而形成的復(fù)雜的病理過程。腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)的降解是腫瘤細(xì)胞進行轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分是膠原，明膠酶具有降解膠原的能力，并且在腫瘤細(xì)胞中的活性明顯增強，因此具有明膠酶

3、活性的蛋白在腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮怎樣的作用成了廣大研究者關(guān)注的熱點之一。
　　絲氨酸蛋白酶(serine-integralmembranepeptidase，SIMP)因具有降解絲氨酸蛋白的特性而得名，結(jié)構(gòu)中心有一特異性的絲氨酸殘基，此殘基被激活后發(fā)揮降解蛋白的作用。SIMP家族可能通過降解蛋白的特性參與腫瘤細(xì)胞的惡性行為。二肽基肽酶Ⅳ（DipeptidylpeptidaseⅣ，DPPⅣ）作為SIMP家族中的重要的成員之一，由

4、于在激活的T淋巴細(xì)胞表面表達又被稱為CD26。已有大量的研究發(fā)現(xiàn)DPPⅣ蛋白具有二肽基肽酶和明膠酶的活性，可通過降解細(xì)胞外基質(zhì)而促進細(xì)胞轉(zhuǎn)移。DPPⅣ在不同個體、不同類型細(xì)胞中發(fā)揮不同效用，既可以調(diào)節(jié)體內(nèi)生物分子活性，又可以降解一些分子發(fā)揮水解蛋白，修復(fù)組織、參與細(xì)胞增殖、促進炎癥擴散，增強腫瘤細(xì)胞的惡性侵襲能力等生理及病理過程。研究發(fā)現(xiàn)DPPⅣ與細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化以及腫瘤的演進過程有關(guān)，國外Hiroto發(fā)現(xiàn)DPPⅣ具有促進惡性間皮瘤細(xì)胞的

5、侵襲、轉(zhuǎn)移及增殖能力等作用，提示DPPⅣ在腫瘤惡性行為方面發(fā)揮促進作用。
　　目前國內(nèi)外對DPPⅣ在惡性腫瘤的增殖及侵襲方面的研究不多，而在卵巢癌中的研究更少，DPPⅣ在卵巢癌細(xì)胞增殖及侵襲方面的作用還不清楚。
　　我們課題組前期研究發(fā)現(xiàn)DPPⅣ在卵巢癌組織及細(xì)胞系SKOV3中的表達均高于正常卵巢組織，DPPⅣ/CD26+的上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖及侵襲能力較DPPⅣ/CD26-的細(xì)胞明顯增強，提示DPPⅣ可能具有促進

6、腫瘤的增殖、侵襲等作用;本實驗通過抑制DPPⅣ的表達進一步來探討DPPⅣ在上皮性卵巢癌細(xì)胞中侵襲及增殖中的作用。進一步明確DPPⅣ在卵巢癌的發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮的作用，為探討卵巢癌浸潤、轉(zhuǎn)移機理提供理論依據(jù)，為卵巢癌的生物治療提供新靶點。
　　方法:
　　1.shCD26（沉默DPPⅣ）、shGAPDH（沉默GAPDH）及shNC（空質(zhì)粒）分別轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞，48小時熒光顯微鏡驗證轉(zhuǎn)染效率。
　　2.RT-PCR及we

7、sternblot分別檢測不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前后SKOV3DPPⅣmRNA及蛋白的表達。
　　3.基底膜侵襲實驗(Transwell)檢測不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前后SKOV3細(xì)胞的侵襲能力。流式細(xì)胞儀檢測不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前后SKOV3細(xì)胞的周期，CCK-8檢測不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前后SKOV3細(xì)胞的增殖活性。
　　結(jié)果:
　　1.不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SKOV348小時，通過熒光顯微鏡計數(shù)shCD26、shGAPDH及shNC組細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率分別為59％、

8、64％和60％;差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.shNC、shCD26、shGAPDH及未轉(zhuǎn)染組(non-tranfected)組中DPPⅣmRNA相對表達量分別為1.20±0.11、0.80±0.01、2.15±0.15和1.32±0.04;shCD26組DPPⅣmRNA表達明顯降低(P＜0.05)，而shCD26組DPPⅣ蛋白表達亦顯著低于其余3組。
　　3.shCD26組、shNC組和non-transfe

9、cted組的穿膜細(xì)胞數(shù)分別為37±4.08、65±4.74和66.8±3.82。shCD26組的穿膜細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞活力均顯著低于shNC組、non-transfected組(P＜0.05)。shCD26組細(xì)胞的G0/G1期比率增加，而S及G2/M期比率降低，與shNC組、non-transfected組比較，差異顯著(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　DPPⅣ可能具有促進上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞侵襲及增殖等作用，從而為探討卵