肺寧對大鼠博萊霉素肺損傷早期治療作用的機(jī)制研究.pdf

1、目的肺纖維化是一種嚴(yán)重的肺部疾病，是許多肺部疾病的共同結(jié)局。目前肺纖維化的發(fā)病呈上升趨勢，其發(fā)病原因各異，發(fā)病機(jī)制也不完全清楚，目前仍沒有令人滿意的治療方法。糖皮質(zhì)激素是目前治療肺纖維化的首選藥物，但近年來報道它可以引起嚴(yán)重的免疫及骨代謝疾病。我們先期的中藥肺寧水煎劑在治療肺纖維化的研究中已初步顯示了其在防治肺纖維化方面的良好前景。本實驗的目的是用我們研制的中藥制劑肺寧浸膏(主要成分為紫花龍膽和三七總苷)對博萊霉素致肺纖維化早期的大鼠肺

2、泡炎進(jìn)行治療，觀察其抗炎效應(yīng)，并初步探討其作用機(jī)理，為臨床肺纖維化的中藥治療奠定理論基礎(chǔ)。 方法(1)利用高效液相色譜-電噴霧-質(zhì)譜/質(zhì)譜(HpLC-ESI-MS/MS)聯(lián)用結(jié)合二極管陣列紫外檢測器(LC-DAD-UV)技術(shù)，通過和標(biāo)準(zhǔn)化合物龍膽苦苷的保留時間、紫外吸收光譜以及質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+相對照，快速鑒定了紫花龍膽提取液中的龍膽苦苷成分。對其含量的測定則采用了毛細(xì)管高效液相色譜方法，以標(biāo)準(zhǔn)化合物龍膽苦苷的進(jìn)樣

3、量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線確定紫花龍膽甲醇提取液中龍膽苦苷的含量。選擇加水量、提取時間、提取次數(shù)作為考察因素，每個因素各取三個水平，以出膏率和龍膽苦苷含量為評價指標(biāo)，用正交試驗優(yōu)選紫花龍膽水提工藝。(2)SD成年大鼠72只隨機(jī)分為正常對照組、模型組、肺寧高中低(4g·kg-1、2g·kg-1、1g·kg-1)劑量組、強的松組，每組12只，雌雄各半。以5mg/kg(濃度10mg/mL)博萊霉素或等量的生理鹽水(正

4、常對照組)氣管內(nèi)注射建立大鼠肺纖維化模型后，第二天開始分別用生理鹽水、強的松和肺寧灌胃治療。分別于建模后7天、14天分2批腹主動脈放血處死各組動物，迅速取肺，左葉肺制成組織勻漿進(jìn)行生化檢測，右葉肺投入10％甲醛中固定，常規(guī)包埋，切片，進(jìn)行HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察肺泡炎的程度。左肺組織勻漿后進(jìn)行超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、腫瘤壞死因子(TNF-α)含量檢測。 結(jié)果：(1)色譜條件經(jīng)優(yōu)化選擇

5、，找到了一種洗脫條件為甲醇與水的梯度洗脫，30分鐘內(nèi)可將各組分較好分離，其中第一個組分吸收峰與龍膽苦苷標(biāo)準(zhǔn)品對照，保留時間均為17分鐘，并且紫外吸收光譜一致，在275nm處均有最大吸收峰。一級質(zhì)譜掃描結(jié)果表明紫花龍膽甲醇提取液中第一個峰化合物結(jié)構(gòu)為龍膽苦苷，準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+為356.9。毛細(xì)管高效液相色譜結(jié)果表明藏藥紫花龍膽中龍膽苦苷成分的百分含量為1.97％。紫花龍膽的最佳水提工藝條件為：加20倍量水，煎煮3次，每次1.5小時

6、。(2)與模型組相比，肺寧不同劑量組大鼠肺泡炎的程度均明顯減輕，將肺泡炎程度進(jìn)行等級轉(zhuǎn)化后進(jìn)行病理半定量分析表明，肺寧高、低劑量組和強的松組大鼠肺泡炎顯著減輕(P＜0.01)，肺寧各劑量組大鼠肺泡炎程度多呈0～2級肺泡炎改變，強的松組多呈1～2級肺泡炎改變；7天時肺寧各劑量組大鼠肺組織勻漿MDA、TNF-α含量顯著降低(P＜0.05)，肺寧高劑量組、強的松組大鼠肺組織勻漿GSH含量顯著升高(P＜0.05)；14天時肺寧各劑量組、強的松組

7、大鼠肺組織勻漿SOD活力、GSH含量均顯著增高(P＜0.05)，MDA含量顯著降低(P＜0.05)，肺寧高、中劑量組大鼠肺組織勻漿TNF-α含量顯著降低(P＜0.05)。 結(jié)論：本課題的實驗結(jié)果表明，肺寧和強的松均對大鼠肺泡炎具有治療作用。其中肺寧可使肺組織勻漿中TNF-α水平下調(diào)，減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，清除氧自由基并削弱炎癥反應(yīng)，減少炎癥細(xì)胞的滲出，在肺纖維化形成的早期發(fā)揮作用，提示其治療作用機(jī)理是抑制前炎癥細(xì)胞因子TNF-α表