腫瘤抗原MAGE-n HLA-A2限制性CTL表位的預(yù)測及鑒定.pdf

1、全文分為以下三個部分:第一部分:表位預(yù)測目的 預(yù)測MAGE-n抗原的一般生物學(xué)特性及HLA-A2限制性CTL表位.方法 用SYFPEITHI超基序法遠程預(yù)測系統(tǒng)和量化基序多項式法結(jié)合的預(yù)測方法,篩選新的MAGE-n抗原HLA-A2限制性CTL表位作為侯選表位.應(yīng)用ANTHEPROTV5.0軟件預(yù)測MAGE-n編碼蛋白的一般生物學(xué)特性.結(jié)論SYFPEITHI超基序法和量化基序多項式法結(jié)合的預(yù)測方法可提高表位預(yù)測的效率及準確性.第二部分:預(yù)

2、測表位的免疫學(xué)特性，目的用表位重建技術(shù)、ELISPOT及特異性殺傷實驗研究HLA-A2限制性CTL候選表位的結(jié)合力及免疫活性.方法 對預(yù)測的抗原表位進行固相合成,并用HPLC進行純化,質(zhì)譜法(MS)鑒定.侯選表位與HLA-A2位點的親和力及結(jié)合穩(wěn)定性用競爭結(jié)合抑制實驗、T2結(jié)合穩(wěn)定性實驗及MHC-肽復(fù)合體穩(wěn)定性實驗測定.RT-PCR法檢測HCC細胞系MAGE-n表達.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法構(gòu)建MAGE-n基因轉(zhuǎn)染細胞系.應(yīng)用ELISPOT技術(shù)檢測

3、抗原肽特異性釋放IFN-γ的T細胞頻數(shù).從HLA-A2陽性健康志愿者外周血分離單個核細胞(PBMC),用T2細胞負載MAGE-n抗原肽反復(fù)刺激活化(每周1次,共4次)誘導(dǎo)抗原肽特異性CTL.乳酸脫氫酶(LDH)釋放法測定誘導(dǎo)CTL對表達MAGE-n的HLA-A2陽性HCC細胞的識別及殺傷效應(yīng).結(jié)論 該研究證實表位重建技術(shù)結(jié)合免疫學(xué)方法(ELISPOT,LDH細胞毒實驗)可提高表位研究的效率和準確性.實驗篩選出的MAGE-n抗原表位QLV

4、FGIEVV可作為特異性免疫治療的靶分子而應(yīng)用于HLA-A2陽性肝癌患者免疫治療.第三部分:荷人肝癌SCID小鼠抑瘤實驗?zāi)康难芯縈AGE-n抗原表位QLVFGIEVV特異性CTL對荷人肝癌SCID小鼠的抑瘤作用.方法 用HHCC(HLA-A2<'+>,MAGEn<'+>細胞皮下接種建立SCID小鼠荷瘤模型.用T2細胞負載抗原肽QLVFGIEVV反復(fù)刺激活化從HLA-A2陽性健康志愿者外周血單個核細胞(PBMC)誘導(dǎo)抗原肽特異性CTL.動