腫瘤抗原cml28hlaa39;0201限制性ctl表位的鑒定39;

1、第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文腫瘤抗原CML28HLA-A0201限制性CTL表位的鑒定姓名：韓俊峰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：吳玉章20040501第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 7 同患者之間 不同組織來源的腫瘤組織間表達(dá)具有差異 而且在同一患者同一類型腫瘤發(fā)展的不同時(shí)期的表達(dá)也有明顯的差異 因此 鑒定盡可能多 CT 抗原的 CTL 表位對(duì)于臨床上惡性腫瘤的免疫學(xué)治療具有重要的意義慢性白血病腫瘤抗原 CML28 是由 Xiao- F

2、eng Yang 等利用 SEREX cDNA 表達(dá)文庫(kù)血清分析 方法鑒定的一種新的 CT 抗原 研究證實(shí) 該腫瘤抗原不僅在慢性白血病等血液系統(tǒng)惡性腫瘤中高表達(dá) 而且在多種上皮來源的實(shí)體腫瘤中也有高水平的表達(dá) 而在睪丸外的正常組織中則未檢測(cè)到表達(dá) 鑒于 HLA-A*0201 是中國(guó)人群中最為常見的 HLA 類分子的型別 陽(yáng)性率高達(dá) 50% 而且也是北美高加索人種中最常見的HLA 類分子的型別 其陽(yáng)性率高達(dá) 98% 因此 如果腫瘤抗原

3、CML28 的 HLA- A*0201限制的 CTL 表位被鑒定 將會(huì)對(duì)于中國(guó)人群中和北美高加索人群中 C M L 2 8 表達(dá)陽(yáng)性的腫瘤的免疫治療 具有十分重要的作用在本實(shí)驗(yàn)中 我們致力于鑒定 CML28 的 HLA- A*0201 限制性 CTL 表位 首先我們采用超基序和量化基序相結(jié)合對(duì)慢性白血病腫瘤抗原 CML28 的 HLA-A2 限制性表位進(jìn)行預(yù)測(cè) 先采用超基序法對(duì)所有可能成為 CML28 抗原的 HLA-A2 型 CTL

4、表位的九肽篩選 發(fā)現(xiàn)符合條件的九肽序列共有 45 條 然后利用量化基序?qū)γ總€(gè)位點(diǎn)的結(jié)合力進(jìn)行量化 應(yīng)用九肽結(jié)合矩陣對(duì) 45 個(gè)表位進(jìn)行計(jì)算和排序 發(fā)現(xiàn)符合條件的肽共有 15 條 我們從中選出親和力最高的四條肽 ALFCGVACA?ALVDAGVPMALDSDGTLV SLLACCLNA 合成純化鑒定 其次 采用表達(dá) HLA-A2 分子的 T2檢測(cè)候選肽與 HLA-A2 分子的結(jié)合情況 候選肽 ALVDAGVPM 和 ALDSDGTLV

5、的親和力較高 FI 值分別是 1.17 1.17 ALFCGVACA 和 SLLACCLNA 僅有低度親和力FI 值分別是 0.49 0.96 最后 采用靈敏度高的 ELISPOT 和 51Cr 釋放法檢測(cè)抗原肽體外刺激HLA- A2 陽(yáng)性的健康人PBMC 所產(chǎn)生的抗原肽特異性的 T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子和溶解活性 結(jié)果顯示 ALVDAGVPM 173- 181 刺激 PBMC 所產(chǎn)生的 T 細(xì)胞能特異性的殺傷 HLA-A2 和 CML28