混合模式色譜柱在抗生素質量分析中的應用暨頭孢曲松降解雜質研究.pdf

1、本論文主要研究了兩性離子交換-反相-親水作用（ZIC-RP-HILIC）混合模式色譜柱的應用及其機理；并利用ZIC-RP-HILIC-MS聯用技術，確證第三代頭孢菌素類抗生素頭孢曲松的降解雜質，考察此藥物的穩(wěn)定性，并對新發(fā)現的頭孢曲松色譜行為互變現象進行研究，建立更加科學、全面的質量控制方法。
　　Ⅰ兩性離子交換-反相-親水作用（ZIC-RP-HILIC）混合模式色譜柱的應用及機理研究
　　目的：利用兩性離子交換-反相-親水

2、作用（ZIC-RP-HILIC）混合模式色譜柱的不同分離模式，1.建立一種藥物鹽離子含量測定的方法，彌補藥典中藥物成鹽量質控方法的空白；2.代替離子對試劑分離分析強極性化合物，建立一種強極性化合物雜質分離、結構確證的方法；提出一種新的二維色譜雜質峰相互識別的方法及雜質結構確證的途徑，尤其解決了強極性化合物結構確證難的問題（即離子對試劑與MS不相容的問題）；3.探討該色譜柱的分離機制，以便快速篩選適合分離的化合物，給實際分析工作帶來方便。

3、
　　方法：1.采用ZIC-RP-HILIC混合模式色譜柱-蒸發(fā)光檢測器（ZIC-RP-HILIC– ELSD），乙酸銨緩沖鹽，建立抗生素藥物成鹽離子的含量測定方法，并進行了方法學驗證；2.利用ZIC-RP-HILIC混合模式色譜-RP色譜-柱切換技術，以青霉素V鉀、苯唑西林鈉、頭孢曲松鈉為例，建立了常規(guī)藥典RP色譜方法和ZIC-RP-HILIC混合模式色譜方法的二維相關色譜分析方法，對RP和ZIC-RP-HILIC色譜系統(tǒng)中的降

4、解雜質峰進行相互識別，并利用MS技術確定雜質結構；3.利用Discover studio軟件預測藥物分子的結構參數，探討ZIC-RP-HILIC混合模式色譜柱與化合物性質之間的關系，確定該色譜柱的適用范圍。
　　結果：1.建立了一種新的HPLC測定藥物鹽離子含量的方法，該方法準確可靠，操作簡便；2.建立了一種 ZIC-RP-HILIC混合模式色譜-RP色譜二維色譜相關分析法，進行抗生素雜質研究，實驗證明該方法簡單易行，在代替離子對

5、試劑對強極性化合物雜質進行分離和結構確證方面有較大優(yōu)勢；3.找出了與化合物色譜行為密切相關的四個化合物參數，確定了該色譜柱適合分析的化合物類型。
　　結論：ZIC-RP-HILIC混合模式色譜柱在離子交換模式下（高鹽相）分離藥物鹽離子、在親水模式下（高有機相）分離強極性化合物方面有較大優(yōu)勢，并且其流動相為揮發(fā)性緩沖鹽，易于MS匹配，用于雜質結構確證。利用線性自由能方程式描述色譜柱與化合物性質之間的關系，是一種表征色譜柱性能的良好方

6、法。
　　Ⅱ頭孢曲松降解雜質研究
　　目的：由于頭孢曲松強極性的特點，其分離方法為反相離子對色譜法，該分離方法操作復雜，不易與MS聯用，并且頭孢曲松在有機酸中降解嚴重，結合ZIC-RP-HILIC混合模式色譜柱的特點，進行頭孢曲松降解動力學研究和降解雜質研究，對新發(fā)現的頭孢曲松色譜行為互變現象進行研究，建立頭孢曲松更加全面、科學的質量控制方法。
　　方法：本文以頭孢曲松為研究對象，進行加速穩(wěn)定性試驗，考察各影響因素對頭

7、孢曲松降解速率的影響；利用ZIC-RP-HILIC混合模式色譜柱-MS聯用技術確定頭孢曲松降解雜質的結構，發(fā)現了一種頭孢曲松在色譜中的互變共存結構，利用NMR技術確定該共存化合物的結構，并找出其產生的原因。
　　結果：頭孢曲松在有機酸中（甲酸、乙酸），三位側鏈易發(fā)生水解反應，生成含羥基化合物和三氮唑，并在不同 pH下產生不同的電離狀態(tài)，在色譜中表現出不同的保留時間，這種現象在離子對試劑存在下異常顯著。因此在利用反相離子對色譜分離含