椒目油防治哮喘氣道重建機制的研究.pdf

1、目的與意義: 哮喘氣道重建（remodeling）又稱氣道重塑或重構，是支氣管哮喘（哮喘）一大重要病理特征。氣道重建主要表現(xiàn)為氣道平滑肌增生、基底膜增厚、腺體增生及上皮下纖維增殖、膠原沉積等，從而造成氣道管壁增厚、管腔狹窄。氣道重建可導致氣流不可逆阻塞和持續(xù)性氣道高反應性，并能成為頑固性哮喘反復發(fā)作的病理學基礎，研究它有利于哮喘的早期防治和阻止哮喘病情的進一步惡化。目前評價任何一個防治哮喘的藥物不僅要看它的平喘作用，而且還要看它

2、能否具有防治氣道重建的作用。 中藥椒目治療支氣管哮喘歷史悠久，療效顯著，目前國內許多單位相繼開展了椒目治療哮喘研究，取得豐碩成果，國內大量的文獻報道以及我們自己的研究成果，無論從分子生物學的角度或是從臨床的角度都說明了椒目能有效治療哮喘。但是椒目能否有效地防止哮喘氣道重建（氣道重塑或重構），目前還未見到文獻報道。本實驗研究選擇與氣道重建密切相關的幾種因素通過復制大鼠哮喘氣道重建模型，初步揭示椒目防治哮喘氣道重建的機制，為更好的應

3、用椒目防治哮喘提供理論依據(jù)。研究內容： 1．探討椒目油對哮喘大鼠氣道重建模型Ⅲ型、V 型膠原的影響。 2．探討椒目油對哮喘大鼠氣道重建模型中TGF-β1 表達的影響。 3．探討椒目油對哮喘大鼠氣道重建模型氣道平滑肌PCNA 表達的影響。 材料與方法： 健康SD大鼠30 只，體重200-250g，將30 只SD大鼠隨機分為3 組：哮喘組(10 只)，椒目油治療組(10 只)，正常對照組(10 只)。

4、參考文獻[3]用l％ OVA和1％氫氧化鋁溶液0.5 ml大鼠腹腔注射，第8 d重復注射1 次，至15d開始吸入1％ OVA溶液激發(fā)5 min。L％ OVA溶液需要每天配制，霧化時將大鼠置于特制塑料容器內霧化吸人。治療組在霧化激發(fā)前1h給予椒目油和熟精油的混合物(按1：1 混合)，以3mL/kg灌胃，對照組以生理鹽水代替OVA致敏和霧化。3 組大鼠在激發(fā)3 個月后處死，經(jīng)右主支氣管注入10％中性甲醛溶液至肺適度膨脹，將右肺連同右主支氣管

5、剪下放入10％中性甲醛固定一周。從右側下肺葉開口處以水平位取材，制成石蠟切片，行HE染色作病理觀察。以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為空白對照，用ABC法，組織切片按序以PB漂洗，30％羊血清，一抗、二抗孵育后浸入ABC液中1 h，取出經(jīng)PBS、Tris-HC1緩沖液漂洗，再以DAB顯色，蘇木精復染，常規(guī)脫水，透明、封蓋。每例標本取2 張切片，每張切片隨機選取小支氣管5 支，應用計算機灰度分析測定粘膜下層吸光度確定Ⅲ型、V型膠原以及T

6、GF-β1 的含量。實驗數(shù)據(jù)用?x±s表示，應用SPSS 11.0 軟件進行t檢驗分析，p<0.05 為差別有統(tǒng)計學意義。 結果： 1. 肺組織HE 染色哮喘氣道重建組大鼠肺組織切片HE 染色可見支氣管上皮細胞腫脹、脫落，管壁增厚，管腔變窄，管壁內及管周有大量炎性細胞浸潤，以EOS 和淋巴細胞為主；椒目油治療組大鼠的肺組織可見支氣管上皮細胞的炎癥反應較哮喘組為輕，支氣管壁及管腔內的炎癥細胞也大為減少；對照組大鼠的肺組織則

7、無上述改變。而且可觀察到哮喘組大鼠氣道壁厚度較對照組明顯增加，椒目油治療組大鼠氣道壁厚度較哮喘氣道重建組明顯降低。 2. 鏡下觀察免疫組化切片的變化Ⅲ型、V 型膠原染色呈棕黃色，Ⅲ型膠原主要在氣道壁粘膜下層表達，V 型膠原表達主要位于基底膜上；測定Ⅲ型、V 型膠原陽性表達的計算機灰度分析：哮喘氣道重建組明顯高于對照組；椒目油治療組低于哮喘氣道重建組(P 均<0.05)而略高于對照組( p<0.05)。 TGF-β1 主要

8、表達在氣道粘膜上皮層，經(jīng)ABC 染色成棕黃色?；叶确治鼋Y果顯示：哮喘氣道重建組明顯高于對照組；椒目油治療組低于哮喘氣道重建組(P 均<0.05) 略高于對照組( p<0.05)。 PCNA 免疫組化染色呈棕黑色圓形顆粒，位于上皮下基底膜、平滑肌細胞及外周成纖維細胞。哮喘氣道重建組陽性表達明顯高于對照組；椒目油治療組明顯低于哮喘氣道重建組；略高于對照組。 結論： 1、椒目油可以降低哮喘大鼠氣道重建氣道壁炎癥反應及氣