新生奶犢牛天然被動抗體IgG吸收規(guī)律的研究.pdf

1、反芻動物的胎盤為結(jié)締組織絨毛膜型，母源抗體不能轉(zhuǎn)移給胎兒。這些動物的幼畜出生后必須通過吮吸初乳才能獲得天然被動免疫力。 主要包括以下過程：分娩前母牛將通過腸道環(huán)境所建立的各種適宜的抗體有選擇的轉(zhuǎn)移并富集到初乳中，產(chǎn)后分泌含有大量免疫球蛋白(Ig)的初乳，犢牛通過吮吸初乳，在腸道完成對Ig的非特異性吸收后，進入血液循環(huán)中，從而避免了仔畜被各種病原微生物的的襲擊。這種由乳汁預(yù)防仔畜減少感染、防止疾病的途徑，也可稱為乳汁免疫(Lact

2、ogenic Immunity)。 初乳中的免疫球蛋白占總?cè)榍宓鞍椎?0％以上，其中80％為IgG，是動物機體抗感染免疫的主力，同時也是血清學(xué)研究主要抗體。國外報道可將吮吸初乳后一段時間內(nèi)犢牛血清中IgG含量作為衡量犢牛被動免疫力轉(zhuǎn)移情況的指標(biāo)。本研究采用ELISA方法檢測初乳和犢牛血清中IgG含量的變化規(guī)律，希望為進一步研究被動免疫提供研究方法和一定的參考。 本研究采用飽和硫酸銨鹽析法從牛血清中粗提IgG，將粗提產(chǎn)物過

3、葡聚糖G200凝膠層析柱得IgG和IgM混合蛋白，再過纖維素DEAE-52柱純化牛IgG，經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定為IgG。免疫兔制備兔抗牛IgG抗體，然后用辣根過氧化酶標(biāo)記，制備兔抗牛IgG酶標(biāo)抗體。同時免疫小白鼠制備鼠抗牛IgG包被抗體。分別建立檢測牛初乳和犢牛血清中IgG的雙抗體夾心ELISA方法。 ELISA操作程序：將小鼠抗牛IgG以包被液(pH9.5的碳酸鹽緩沖液)稀釋成最適包被濃度30μg/mL，分別吸取100

4、μL包被反應(yīng)板，同時各板設(shè)陰、陽性對照、抗體對照、酶標(biāo)抗體對照和底物對照，置37℃溫育3h，用去包被液，用含0.05％Tween-20的0.01mol/LpH7.4 PBS(PBST)作為洗滌液進行洗滌3次，每次3min(即3×3’洗滌)；加4倍稀釋的待檢初乳100μL或100倍稀釋的待檢犢牛血清，37℃感作1.5h，3×3’洗滌；將酶標(biāo)抗體用0.1％BSA-PBST稀釋成工作濃度1：400，每孔加入100μL，37℃感作1h，3×3’

5、洗滌；每孔加入新配制的底物(OPD)溶液100μL，37℃濕盒避光感作30min；每孔加2mol/L H2SO4一滴終止反應(yīng)，以酶聯(lián)免疫檢測儀測定OD值(490nm)，判定結(jié)果。 按試驗設(shè)計采集四平地區(qū)某大型奶牛場一個月內(nèi)分娩的20頭奶牛的初乳以及新生犢牛血清。應(yīng)用建立的初乳和犢牛血清雙抗體夾心ELISA方法進行檢測。 結(jié)果表明： 1.初乳中IgG的蛋白含量從分娩后0h開始至第7天，變化呈現(xiàn)出一定的規(guī)律。