脂氧素A4調(diào)節(jié)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性的機(jī)制初探.pdf

1、研究背景：血管內(nèi)皮作為機(jī)體調(diào)節(jié)心腦血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)最大的代謝和內(nèi)分泌器官越來越受到重視，其重要功能之一即是作為血液和組織間物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的屏障，一旦血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，則必將影響甚至破壞內(nèi)皮細(xì)胞正常的生物學(xué)功能，最明顯的表現(xiàn)即是血管內(nèi)皮的通透性增加，它將導(dǎo)致全身系統(tǒng)性的疾病產(chǎn)生，諸如動(dòng)脈粥樣硬化形成，高血壓，先兆子癇引起的水腫等疾病。因此，如何保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞免受損害，維持正常的內(nèi)皮通透性顯然成為了心腦血管等疾病預(yù)防領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。由于炎性氧化應(yīng)激引起

2、內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加引起血栓、水腫是心血管疾病、微血管功能障礙的重要致病表現(xiàn)。而脂氧素（Lipoxins,LXs）作為第一個(gè)在活體內(nèi)被鑒定的內(nèi)源性剎車信號(hào)家族成員，具有促進(jìn)炎癥消退的作用，于此同時(shí)本實(shí)驗(yàn)室組曾報(bào)道脂氧素在脂多糖刺激的巨噬細(xì)胞中能夠發(fā)揮抗氧化作用，病理性妊娠及心血管疾病患者的血中脂氧素含量相當(dāng)?shù)?，這提示我們脂氧素很有可能對(duì)炎性氧化應(yīng)激引起內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加起到緩解作用以維持正常的內(nèi)皮功能。
　　 目的：探討脂氧素對(duì)脂

3、多糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞高通透性的調(diào)節(jié)及其作用機(jī)制。
　　 方法：培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株CRL-1730，實(shí)驗(yàn)分為三組：空白對(duì)照組，脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）刺激組，脂多糖（LPS）+脂氧素A4（LXA4）干預(yù)組，蘇木精-伊紅染色法（Hematoxylin&Eosine，HE）觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，單層內(nèi)皮細(xì)胞通透性測(cè)定方法測(cè)定細(xì)胞通透性，活性氧試劑盒檢測(cè)活性氧（Reactive Oxygen Spec

4、ies，ROS）含量，Real-time PCR檢測(cè)（Formyl-peptide receptor like 2，F(xiàn)PRL2）受體的表達(dá)，RT-PCR法分別檢測(cè)血管內(nèi)皮鈣粘附素（VE-cadherin）、β-catenin、瞬間受體電位通道（Transient receptor potentialchannel 1，TRPC1）的mRNA水平，免疫印跡法檢測(cè)VE-cadherin、β-catenin的蛋白含量，熒光免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察V

5、E-cadherin的表達(dá)，鈣成像技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的變化。
　　 結(jié)果：⑴．LXA4刺激后，CRL-1730的FPRL2受體表達(dá)與原代HUVEC細(xì)胞受體表達(dá)量接近且LXA4能夠上調(diào)FPRL2的表達(dá)。
　　 ⑵與對(duì)照組相比，LPS刺激組細(xì)胞形態(tài)變圓且小，細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙變大，LPS+LXA4組接近正常對(duì)照組。
　　 ⑶與對(duì)照組相比，LPS刺激組細(xì)胞的通透性明顯增加(**P<0.01).，LPS+LXA4組能有

6、效的抑制通透性的變化(**P<0.01)，但無LXA4劑量依賴性，LPS+LXA4+BOC-2組通透性仍然增加(**P<0.05)，進(jìn)一步驗(yàn)證人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株發(fā)揮作用很可能由脂氧素受體FPRL2介導(dǎo)。
　　 ⑷與對(duì)照組相比，LPS刺激組VE-cadherin、β-catenin的mRNA及蛋白水平均下調(diào)，TRPC1的mRNA水平增加(*P<0.05)，免疫熒光顯示VE-cadherin表達(dá)減弱，細(xì)胞間間隙增大，LPS+LXA4

7、組VE-cadherin、β-catenin mRNA及蛋白水平相對(duì)于LPS刺激組表達(dá)均上調(diào)(*P<0.05)，TRPC1的mRNA水平較LPS刺激組低(*P<0.05)，VE-cadherin熒光也接近對(duì)照組，間隙沒有明顯增大。
　　 ⑸ LPS刺激組中ROS的產(chǎn)量高于對(duì)照組(*P<0.05)，LPS+LXA4組ROS的產(chǎn)量較LPC刺激組有明顯下降(*P<0.05)⑹與對(duì)照組相比，LPS刺激組胞內(nèi)F340/F380熒光比值明顯