CHO表達系統(tǒng)的遺傳改造.pdf

1、哺乳動物細胞表達系統(tǒng)具有準確的轉錄后修飾功能,表達的糖基化蛋白藥物在分子結構、理化性質和生物學功能方面最接近天然蛋白分子,是目前重組糖蛋白藥物生產的首選體系.對于較復雜的分子如基因工程抗體,以及基因治療用病毒載體,哺乳動物細胞更是首選的表達宿主.但哺乳動物細胞表達系統(tǒng)的缺點也很明顯,如表達量低、大規(guī)模培養(yǎng)困難、生產成本高昂等.一株成功的工程細胞除了要求目的蛋白的表達量高外,還必須適應無血清培養(yǎng)基培養(yǎng);必須具有對不利環(huán)境的抵抗能力,即抗凋

2、亡能力;對于非直接懸浮培養(yǎng)的細胞,還必須具備在無血清培養(yǎng)條件下的貼壁能力.工程細胞上述能力的獲得僅由培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件優(yōu)化設計很難實現,必須從工程細胞本身著手,對細胞本身的生理特征進行改造,才有可能實現.鑒于中國倉鼠卵巢(CHO)細胞是目前基因工程制藥最常用的哺乳動物宿主細胞,該研究集中對CHO細胞的部分基因進行了過表達或抑制,以期獲得上述能力.實驗分成四部分:1.高效哺乳動物細胞表達載體的構建;2.抗凋亡工程細胞株CHO-A6的構建