視黃酸誘導(dǎo)基因-Ⅰ及趨化因子受體在特發(fā)性炎癥性肌病免疫病理機(jī)制中的作用研究.pdf

1、文章內(nèi)容分為兩部分
　　論文Ⅰ 視黃酸誘導(dǎo)基因-Ⅰ蛋白在特發(fā)性炎癥性肌病肌肉組織中的表達(dá)及意義
　　背景:
　　特發(fā)性炎癥性肌病(idiopathic inflammatory myopathies，IIMs)主要包括皮肌炎(dermatomyositis，DM)、多發(fā)性肌炎(polymyositis，PM)及包涵體肌炎(inclusionbody myositis，IBM)三個(gè)亞型，是一組獲得性骨骼肌自身免疫性疾病。

2、其中DM和PM在國內(nèi)較常見。IIMs的免疫病理機(jī)制至今尚未闡明。通常認(rèn)為:DM是體液免疫介導(dǎo)的一種累及皮膚和肌肉的微血管病變，而PM的病理過程則主要由細(xì)胞免疫介導(dǎo)。而近年來研究表明，除了前述的適應(yīng)性免疫機(jī)制外，Ⅰ型干擾素介導(dǎo)的固有免疫機(jī)制在IIMs（尤其是DM）的發(fā)病機(jī)制中同樣起重要作用，其中漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(plasmacytoid dendritic cells，pDCs)被認(rèn)為是Ⅰ型干擾素的主要來源。人體內(nèi)抗原提呈細(xì)胞主要通過T

3、oll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)和視黃酸誘導(dǎo)基因-Ⅰ（retinoic acid induced geneⅠ，RIG-Ⅰ）蛋白兩種途徑激活Ⅰ型干擾素系統(tǒng)。而IIMs中pDCs以何種途徑產(chǎn)生Ⅰ型干擾素目前仍不清楚。
　　目前國外已有多項(xiàng)研究證實(shí)多種TLRs（包括TLR2、TLR3、TLR4、TLR7及TLR9等）在IIMs肌肉組織中表達(dá)明顯增高，其被認(rèn)為在IIMs的固有免疫和適應(yīng)性免疫病理機(jī)制中均發(fā)揮

4、重要作用，我們?cè)谥暗难芯恐幸沧C實(shí)在DM肌肉組織中中pDCs與TLR7/9存在廣泛的共表達(dá)，提示DM肌肉組織中pDCs可通過TLRs途徑產(chǎn)生Ⅰ型干擾素。而RIG-Ⅰ在IIMs肌肉組織中的表達(dá)及功能目前國內(nèi)外研究較少。
　　目的:
　　明確RIG-Ⅰ在IIMs肌肉組織中的表達(dá)特點(diǎn)，并結(jié)合RIG-Ⅰ的功能探討其在IIMs免疫病理機(jī)制中的作用。
　　材料和方法:
　　本研究為回顧性病例-對(duì)照研究，我們選取了40例DM/

5、PM患者，其中DM和PM各20例。同時(shí)選取4例肌活檢未見明顯異常的病例作為正常對(duì)照以及4例面肩肱型肌營養(yǎng)不良(facioscapulohumeral muscular dystrophy, FSHD)病例作為疾病對(duì)照。所有活檢肌肉標(biāo)本均進(jìn)行HE染色及RIG-Ⅰ免疫組織化學(xué)染色;應(yīng)用Western-blot定量檢測肌肉組織中RIG-Ⅰ的表達(dá)含量;并用雙重免疫熒光方法檢測DM/PM肌肉標(biāo)本中RIG-Ⅰ與漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(pDCs)的特異性

6、表面標(biāo)記分子CD303的共表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、免疫組化結(jié)果表明:RIG-Ⅰ在正常肌肉組織中無陽性表達(dá)，而在DM和PM中可見明顯陽性表達(dá)，以炎癥細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性陽性表達(dá)以及壞死和再生肌纖維胞漿處的非特異性弱陽性表達(dá)為主，另外在伴有束周萎縮的DM中尚可見RIG-Ⅰ在束周肌纖維胞漿中的強(qiáng)陽性表達(dá)，而在FSHD中則僅見壞死和再生肌纖維胞漿處RIG-Ⅰ的非特異性弱陽性表達(dá)。
　　2、雙重免疫熒光染色結(jié)果顯示:在

7、DM/PM肌肉標(biāo)本中，未檢測到RIG-Ⅰ與CD303的共表達(dá)。
　　3、Western-blot結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比（包括FSHD和正常對(duì)照）DM/PM組肌肉組織中的RIG-Ⅰ表達(dá)含量顯著上調(diào)，兩組之間差異具有顯著性(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　RIG-Ⅰ在DM/PM肌肉組織中的表達(dá)含量顯著上調(diào)，提示其在一定程度上參與了IIMs免疫病理機(jī)制過程，結(jié)合其分布特點(diǎn)及功能推測它可能參與了調(diào)節(jié)Thl細(xì)胞因子誘導(dǎo)的趨化因

8、子表達(dá)，而在Ⅰ型干擾素介導(dǎo)的固有免疫病理機(jī)制中可能不起主要作用。
　　論文Ⅱ 趨化因子受體介導(dǎo)的皮肌炎肌肉組織中漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞的募集
　　背景:
　　皮肌炎(DM)是一種公認(rèn)的獲得性骨骼肌自身免疫性疾病，為特發(fā)性炎癥性肌病(IIMs)的一個(gè)亞型。其發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明。長期以來DM被認(rèn)為是體液免疫介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫為主的自身免疫性疾病。而近年來研究表明，除適應(yīng)性免疫外，Ⅰ型干擾素(IFN-Ⅰ)介導(dǎo)的固有免疫在DM

9、免疫病理機(jī)制中發(fā)揮重要作用。而肌束周圍漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(pDCs)的局部聚集被認(rèn)為是導(dǎo)致IFN-Ⅰ在肌束周圍過度生成的原因，但目前尚不清楚DM肌肉組織中聚集的pDCs的來源及遷移途徑。
　　對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)等自身免疫性疾病的研究認(rèn)為:循環(huán)中的pDCs可能是通過一定的機(jī)制募集到SLE相應(yīng)靶器官中（如皮膚或淋巴結(jié)），而多種趨化因子受體如CXCR3、CXCR4及CCR7及其相應(yīng)配體在pDCs的遷移及成熟中發(fā)揮了重要作用。而上

10、述受體是否參與了DM肌肉組織中pDCs的募集，目前國內(nèi)外尚無相關(guān)方面的研究。
　　目的:
　　明確趨化因子受體CXCR3、CXCR4及CCR7在DM肌肉組織與外周血pDCs上的表達(dá)特點(diǎn)，進(jìn)而探討DM中趨化因子受體對(duì)pDCs的募集作用。
　　材料與方法:
　　對(duì)DM肌肉組織標(biāo)本進(jìn)行HE染色和CXCR3/CXCR4/CCR7抗體免疫組織化學(xué)染色;并應(yīng)用Western-blot定量分析CXCR3、CXCR4和CCR7在

11、DM肌肉組織中的表達(dá);同時(shí)用pDCs表面標(biāo)記分子CD123分別與CXCR3、CXCR4和CCR7抗體進(jìn)行雙重免疫熒光染色;從外周靜脈血中分離單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析PBMCs中pDCs所占比例以及及CXCR3/CXCR4/CCR7在外周血pDCs上的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　肌肉免疫組織化學(xué)染色表明CXCR3/CXCR4/CCR7均大量分布于DM/PM肌內(nèi)膜和肌束膜浸潤的炎癥細(xì)胞上，此外CXCR4和CCR7

12、還表達(dá)于DM組、PM組及正常對(duì)照組的肌內(nèi)血管壁上;Western-blot定量分析發(fā)現(xiàn)與正常對(duì)照組相比，DM/PM組肌肉組織中CXCR3/CXCR4/CCR7含量顯著上調(diào)，差異具有顯著性，p＜0.05，但DM組與PM組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;雙重免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)DM肌肉組織中存在較多CXCR3/CXCR4/CCR7陽性的pDCs，而PM及正常對(duì)照中pDCs數(shù)量很少;流式細(xì)胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)DM/PM組與正常對(duì)照組相比外周血pDCs含量顯著減少，且pD