PRRSV GP5蛋白基因重組牛痘病毒的構(gòu)建及免疫學(xué)初步研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由PRRS病毒引起的豬的一種高度傳染病，主要以妊娠母豬發(fā)生早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、弱胎及各年齡豬特別是仔豬的呼吸道疾病為特征。自1987年美國首次發(fā)現(xiàn)以來，現(xiàn)已遍及世界各主要養(yǎng)豬國家與地區(qū)，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，因此國際獸疫局將其列為B類傳染病，我國將其列為二類傳染病。
　　GP5蛋白是PRRS

2、V的主要結(jié)構(gòu)蛋白，可誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體，因此GP5蛋白基因是研究PRRSV新型疫苗的主要目的基因。本研究根據(jù)PRRSV基因組GP5基因序列，設(shè)計合成三對引物，應(yīng)用RT-PCR擴(kuò)增PRRSV CH-1a株GP5蛋白基因，將目的片段克隆至pMD-18T載體，亞克隆構(gòu)建三種質(zhì)粒，分別為真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-GP5和原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-GP5、穿梭質(zhì)粒pSC11-GP5。WR株牛痘病毒(CPV)感染TK-143細(xì)胞后，用pSC11-GP

3、5轉(zhuǎn)染TK-143細(xì)胞，與牛痘病毒進(jìn)行同源重組。在含有X-gal的瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行藍(lán)斑篩選，最終獲得了含有PRRSV GP5基因的重組牛痘病毒(rWR-PRRSV-GP5)。分別以rWR-PRRSV-GP5、pcDNA3.1-GP5免疫小鼠，分離血清，以原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-GP5表達(dá)的蛋白為抗原，進(jìn)行間接ELISA檢測，結(jié)果顯示所構(gòu)建的重組牛痘病毒rWR-PRRSV-GP5與真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-GP5在小鼠體內(nèi)可誘導(dǎo)特異性抗