Duchenne-Becker肌營(yíng)養(yǎng)不良致病基因DMD的分子診斷技術(shù)體系研究.pdf

1、Duchenne/Becker 肌營(yíng)養(yǎng)不良（Duchenne/Becker muscular dystrophy, DMD/BMD）是最常見的X連鎖隱性遺傳病之一，在男性人群中的發(fā)病率約為1/3500，女性人群中的攜帶率約為1/2300。其致病基因DMD部分區(qū)域的缺失、重復(fù)或點(diǎn)突變會(huì)影響其編碼的Dystrophin蛋白表達(dá)，導(dǎo)致骨骼肌萎縮和無(wú)力。細(xì)致檢測(cè)其基因序列，明確突變位點(diǎn)，對(duì)提供準(zhǔn)確的遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷十分重要，在治療方法的選擇和

2、預(yù)后判斷上也有很大幫助。多重連接依賴的探針擴(kuò)增技術(shù)（multiplex ligation dependent probe amplification, MLPA）作為一種新興的診斷方法，可對(duì)DMD基因全部外顯子的拷貝數(shù)異常進(jìn)行檢測(cè)。國(guó)內(nèi)外已有多篇采用MLPA配合其他方法對(duì)DMD/BMD進(jìn)行診斷的報(bào)道，但是很少有報(bào)道涉及MLPA在DMD基因檢測(cè)應(yīng)用中的優(yōu)勢(shì)和局限，以及可能造成假陽(yáng)性的單外顯子異常結(jié)果的處理方法。
　　 本研究應(yīng)用M

3、LPA對(duì)72例確診的DMD/BMD患者進(jìn)行了外顯子缺失/擴(kuò)增檢測(cè)，確認(rèn) 50例缺失/擴(kuò)增（69.44％），疑似3例（4.17％）；對(duì)單外顯子異常結(jié)果通過PCR、測(cè)序和熒光定量PCR進(jìn)行進(jìn)一步結(jié)果驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)3例與MLPA原有結(jié)果不符，假陽(yáng)性率在結(jié)果驗(yàn)證的樣本中占16.7％。由于技術(shù)局限，MLPA只能檢測(cè)單個(gè)或多個(gè)外顯子的缺失/重復(fù)，忽視占突變總數(shù)近20％左右的單個(gè)外顯子內(nèi)的微小缺失、擴(kuò)增等突變形式。而在現(xiàn)有的其他檢測(cè)方法中，也沒有簡(jiǎn)便的方

4、法適合臨床開展。針對(duì)這種情況，研究的第二部分基于本科室的專利平臺(tái)——多重延伸連接依賴的探針擴(kuò)增技術(shù)（Multiplex extension ligation dependent probe amplification，MELPA），設(shè)計(jì)了一系列可檢測(cè)DMD基因全部外顯子的探針組，用含有微小突變的樣本進(jìn)行檢驗(yàn)證明其可行，并對(duì)10例MLPA檢測(cè)為陰性的確診樣本進(jìn)行了篩查。MLPA技術(shù)成為DMD基因外顯子拷貝數(shù)異常的首選檢測(cè)方法的同時(shí)，結(jié)果提