反義血管平滑肌α肌動(dòng)蛋白基因轉(zhuǎn)染抑制腎纖維化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的 構(gòu)建反義血管平滑肌α肌動(dòng)蛋白基因腺病毒載體(padanti-α-SMA),研究pAdanti-α-SMA轉(zhuǎn)染的腎小管上皮細(xì)胞(TEC)能否耐受轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)分化,研究padanti-α-SMA轉(zhuǎn)染的5/6腎切除大鼠腎纖維化(RFB)進(jìn)展.最終驗(yàn)證其是否具有抑制RFB的作用并探討該作用的可能機(jī)制.方法 第一部分 腺病毒載體構(gòu)建和鑒定:設(shè)計(jì)引物提取反義血管平滑肌-α肌動(dòng)蛋白(α-SMA)基因片斷,構(gòu)建pGEM

2、-T-Easy-anti-α-SMA過渡質(zhì)粒和pShuttle-CMV-anti-α-SMA穿梭質(zhì)粒,最終構(gòu)建pAdanti-α-SMA,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)和形態(tài)變化,行免疫熒光檢測(cè)并計(jì)數(shù)α-SMA陽(yáng)性細(xì)胞,行Western Blot檢測(cè)-α-SMA蛋白.第三部分 動(dòng)物實(shí)驗(yàn):用pAdanti-α-SMA轉(zhuǎn)染5/6腎功除大鼠,觀察大鼠存活率、體重變化、腎功能變化、腎臟病理和腎損傷指數(shù),免疫組化檢測(cè)α-SMA、TGF-β1和PDGF-BB表達(dá)并行