A型肉毒毒素裂解SNAP-25在被川楝素阻斷后仍抑制乙酰膽堿誘發(fā)離體幽門肌收縮.pdf

1、背景與目的： A型肉毒毒素(botulinum toxin type A，BTX-A)選擇性地裂解突觸相關(guān)蛋白-25(synaptosomal-associated protein of25 kDa，SNAP-25)，阻斷突觸囊泡中神經(jīng)遞質(zhì)與突觸前膜的融合、胞吐和釋放。川素(toosendanin，TSN)近期被證實(shí)通過阻斷BTX-A裂解SNAP-25而具有抗肉毒毒素功能。本研究依離體大鼠幽門平滑肌為實(shí)驗對象，應(yīng)用TSN阻斷BTX-A裂

2、解SNAP-25后，觀察BTX-A是否仍對乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)誘發(fā)的平滑肌收縮起抑制作用，以期揭示BTX-A對平滑肌存在的作用途徑。 方法：三組Sprague-Dawley大鼠的幽門離體平滑肌條在Krebs液中1g的前負(fù)荷下孵育52分鐘左右，待出現(xiàn)自發(fā)性收縮波且平穩(wěn)后分別加入ACh，BTX-A，TSN和Atropine。第一組(n=10)：肌條對ACh 100μM出現(xiàn)反應(yīng)10分鐘后，分別加入Atropi

3、ne 1μM(n=5)或BTX-A 10 U/ml(n=5)記錄4小時；第二N(n=10)：肌條對BTX-A 10U/ml(n=5)或Atropinel μM(n=5)出現(xiàn)反應(yīng)30分鐘后，加入ACh 100μM記錄4小時；第三組(n=5)：肌條在含TSN 29.6μM溶液中孵育20分鐘后，加BTX-A 10U/ml，30分鐘后再加ACh 100 μM記錄4小時。 結(jié)果：第一組：ACh 100μM顯著地增強(qiáng)了幽門收縮的張力(P<0

4、.001)和頻率(P<0.001)，但振幅無顯著性差異：后續(xù)加入BTX-A 10 U/ml抑制了ACh誘發(fā)的收縮作用(張力，P<0.001；頻率，P<0.001；振幅，P=0.014)。然而，Atropine 1μM卻完全性抑制了ACh誘發(fā)的收縮反應(yīng)。這一結(jié)果顯示BTX-A10 U/ml直接抑制了ACh誘發(fā)的收縮反應(yīng)。第二組：BTX-A 10 U/ml直接抑制了幽門自發(fā)性收縮(張力，P=0.006；頻率，P<0.001；振幅，P<0.0

5、01)；Atropinel μM同樣抑制了幽門肌的收縮。隨后加入ACh100μM不能再激發(fā)幽門肌的收縮。 第三組： TSN 29.6μM孵育20分鐘，幽門平滑肌的自發(fā)性收縮未發(fā)生變化；加入BTX-A 10U/ml后，BTX-A降低幽門肌收縮反應(yīng)(張力，P<0.001：振幅，P<0.001)。雖然這種抑制作用與未加TSN時BTX-A的效應(yīng)不盡相似，但是BTX-A10 U/ml仍然抑制了幽門平滑肌收縮，即使ACh 100μM也同樣不