人工關(guān)節(jié)硅酸二鈣涂層離子液對(duì)體外培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、成骨分化的影響.pdf

1、目的：通過(guò)體外培養(yǎng)、純化、擴(kuò)增MSCs及擴(kuò)增后的MSCs與硅酸二鈣涂層離子液復(fù)合培養(yǎng)，探討硅酸二鈣涂層離子液對(duì)體外培養(yǎng)MSCs增殖的影響，并通過(guò)測(cè)定MSCs成骨分化及成骨分化相關(guān)基因的表達(dá)情況，探討硅酸二鈣涂層離子液對(duì)體外培養(yǎng)MSCs成骨分化及成骨分化特異性基因表達(dá)的影響及其可能機(jī)制。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)共分四組：A組：空白組；B組：硅酸二鈣涂層離子液組；C組：成骨誘導(dǎo)劑組；D組：成骨誘導(dǎo)劑+硅酸二鈣涂層離子液組，各組中分別接種來(lái)

2、自體外采用密度梯度離心法分離人骨髓單個(gè)核細(xì)胞并通過(guò)貼壁培養(yǎng)純化、擴(kuò)增后的骨髓MSCs，并通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞表面抗原CD34、CD44鑒定細(xì)胞。采用倒置顯微鏡觀察MSCs不同時(shí)期的細(xì)胞形態(tài)，MTT法測(cè)定MSCs3、7、10、14d細(xì)胞增殖情況；生化法測(cè)定3、7、14dMSCs細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶(ALP)活性，RT-PCR檢測(cè)14d成骨細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子(Cbfal)、骨鈣素(OC)基因表達(dá)情況，并進(jìn)行初步比較。
　　 結(jié)果：采用

3、Percoll密度梯度離心結(jié)合貼壁篩選法在體外能夠培養(yǎng)出純度較高的MSCs，流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞表面抗原CD44，CD34陽(yáng)性率分別為94.83％、3.39％，顯示均一性較好。在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中，各組MSCs細(xì)胞在3d～7d快速增殖，7d～10d趨于平緩，10d～14d呈下降趨勢(shì)。與A組相比，B、C、D各組MSCs增殖在各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)都增強(qiáng)，特別是D組在7d和14d時(shí)的差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），在3d和10d時(shí)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

4、義(P＜0.05)，同時(shí)，B組在7d時(shí)、C組在10d時(shí)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與D組相比，B組在7、10、14d時(shí)、C組在7d時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。MSCs細(xì)胞內(nèi)ALP活性在3d～7d逐漸增強(qiáng)，7d～14d呈下降趨勢(shì)，而與A組相比，B、C、D組MSCs細(xì)胞內(nèi)ALP活性在各時(shí)間點(diǎn)均高，其中C、D組的差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，B組在14d時(shí)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與B組相比，C、D組在3

5、、7、14時(shí)的差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。在14d時(shí)，MSCs成骨分化晚期標(biāo)志OCmRNA的表達(dá)C、D組明顯高于A、B組，同時(shí)，D組高于C組；B組高于A組。而成骨分化早期標(biāo)志CafalmRNA的表達(dá)B組明顯高于A組，C組高于D組。
　　 結(jié)論：采用Percoll密度梯度離心結(jié)合貼壁篩選法在體外能夠培養(yǎng)出純度較高的MSCs;硅酸二鈣涂層離子液自身能夠在一定程度上促進(jìn)MSCs增殖，并誘導(dǎo)其向成骨分化；同時(shí)，與成骨誘導(dǎo)劑協(xié)同