股骨頭韌帶結(jié)扎誘發(fā)家兔股骨頭結(jié)構(gòu)變化的形態(tài)學(xué)觀察.pdf

1、目的:股骨頭缺血性壞死(avascularorischemicnecrosisoffemoralhead，ANFH)是臨床上的一種常見(jiàn)的骨科疾病，也是骨科實(shí)驗(yàn)研究的熱點(diǎn)與難點(diǎn)。ANFH的好發(fā)年齡一般為30～50歲，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，主要是由于創(chuàng)傷、應(yīng)用激素、過(guò)度飲酒、結(jié)締組織疾病等各種原因?qū)е鹿晒穷^局部滋養(yǎng)血管損傷，從而引起股骨頭組織的病理變化，引起相應(yīng)的臨床表現(xiàn)。如不能進(jìn)行及時(shí)的、有效的治療，最后不得不進(jìn)行人工關(guān)節(jié)置換術(shù)。各種原因?qū)е碌?/p>

2、股骨頭壞死，首先會(huì)影響供應(yīng)股骨頭區(qū)域的血運(yùn)，導(dǎo)致股骨頭一定區(qū)域的供血不足，最終引起相應(yīng)的區(qū)域發(fā)生缺血性壞死。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)結(jié)扎股骨頭韌帶的方法，阻斷其供應(yīng)股骨頭區(qū)域的血液供應(yīng)，觀察其阻斷前后的股骨頭的形態(tài)學(xué)變化，探討通過(guò)股骨頭韌帶的血供與股骨頭缺血性壞死的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與模型制備
　　 選用5月齡新西蘭大白兔16只，體重2.0kg～2.5kg，雌雄不限，單籠飼養(yǎng)，正常飲食，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周

3、。隨機(jī)分為手術(shù)組12只和手術(shù)對(duì)照組4只。
　　 1.1.手術(shù)組:家兔仰臥位固定于兔臺(tái)，耳緣靜脈注射10％水合氯醛（2.4ml/kg）麻醉，右側(cè)髖關(guān)節(jié)進(jìn)行手術(shù)，左側(cè)作為對(duì)照。下腹部中線旁開(kāi)1cm垂直切口，切口2～3cm，逐層打開(kāi)皮膚，筋膜層，于肌間隙撥開(kāi)，打開(kāi)髖關(guān)節(jié)囊，股骨旋外位，找到股骨頭韌帶并結(jié)扎，并使旋外以致股骨頭脫位后復(fù)位，關(guān)閉縫合關(guān)節(jié)囊，逐層縫合肌層、筋膜層、皮膚。
　　 1.2.手術(shù)對(duì)照組:只打開(kāi)關(guān)節(jié)囊，找尋到

4、股骨頭韌帶，不進(jìn)行結(jié)扎，不造成股骨頭脫位，直接關(guān)閉縫合關(guān)節(jié)囊，如結(jié)扎組相同，逐層縫合。兩組均右側(cè)進(jìn)行手術(shù)，左側(cè)作為正常對(duì)照。于術(shù)后4周，8周，12周分批處死，取下雙側(cè)股骨頭，固定，制備光鏡和掃描電鏡標(biāo)本，進(jìn)行光鏡和掃描電鏡觀察。
　　 2.光鏡樣品制備與觀察
　　 兩組股骨頭標(biāo)本做適當(dāng)處理后，經(jīng)石蠟包埋切片，進(jìn)行常規(guī)HE染色、免疫組織化學(xué)染色，觀察比較兩組股骨頭組織結(jié)構(gòu)的變化。
　　 3.掃描電鏡樣品制備與觀察<

5、br>　　 選取正常組與手術(shù)組股骨頭標(biāo)本，經(jīng)過(guò)醛類(lèi)混合固定液固定后，經(jīng)過(guò)常規(guī)導(dǎo)電處理、固定、脫水、真空干燥等處理后，固定于電鏡樣品托上，掃描電鏡觀察股骨頭關(guān)節(jié)面的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。
　　 結(jié)果:
　　 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)后狀態(tài)觀察
　　 術(shù)后一周內(nèi)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物手術(shù)側(cè)輕度跛行，活動(dòng)減少，精神狀態(tài)稍差，飲食減少。一周后，狀態(tài)轉(zhuǎn)好，傷口愈合良好，運(yùn)動(dòng)增多，毛發(fā)光潔。兩周后，動(dòng)物恢復(fù)術(shù)前狀態(tài)，傷口基本愈合，傷口縫線全部脫落，一期愈合

6、。
　　 2股骨頭標(biāo)本的大體觀察
　　 手術(shù)組術(shù)后一周，股骨頭整體外形圓而光滑，關(guān)節(jié)軟骨面尚且正常。術(shù)后一月后的標(biāo)本，股骨頭外形均圓，有一個(gè)標(biāo)本圓韌帶周?chē)P(guān)節(jié)軟骨面稍顯蒼白色。兩月后股骨頭標(biāo)本，股骨頭圓韌帶周?chē)年P(guān)節(jié)軟骨有輕微剝脫，稍顯不光滑，有輕微塌陷。對(duì)照組關(guān)節(jié)面術(shù)后一周關(guān)節(jié)面正常，術(shù)后一月關(guān)節(jié)面稍顯蒼白色，關(guān)節(jié)面光滑正常，術(shù)后兩月關(guān)節(jié)面大致均圓。
　　 3.光鏡觀察
　　 3.1.HE染色的組織切片

7、
　　 對(duì)照組軟骨膜正常，軟骨下血管豐富，軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)正常。骨小梁豐富，規(guī)則，骨細(xì)胞多，骨陷窩少，邊緣可見(jiàn)正常成骨細(xì)胞，松質(zhì)骨內(nèi)骨髓造血細(xì)胞數(shù)量多，脂肪細(xì)胞少。模型組軟骨膜脫落，軟骨下血管幾乎全部缺失。骨小梁細(xì)長(zhǎng)，不規(guī)則，甚至發(fā)生斷裂?？展窍莞C比率增大，松質(zhì)骨內(nèi)骨髓造血細(xì)胞減少，滿視野較大的脂肪細(xì)胞（泡沫細(xì)胞）。
　　 3.2.免疫組織化學(xué)染色的切片
　　 結(jié)扎股骨頭韌帶后，在股骨頭軟骨下，骨形態(tài)發(fā)生蛋白在軟骨層

8、底部的肥大軟骨細(xì)胞上表達(dá)較正常組稍增強(qiáng)，同時(shí)在軟骨及軟骨陷窩周?chē)加斜磉_(dá)。
　　 4.股骨頭關(guān)節(jié)面掃描電鏡觀察
　　 掃描電鏡下觀察股骨頭韌帶周?chē)年P(guān)節(jié)軟骨面，對(duì)照組的軟骨表面面光滑，較規(guī)則、平整。手術(shù)組的股骨頭韌帶周?chē)?，關(guān)節(jié)軟骨表面出現(xiàn)表層復(fù)層扁平上皮細(xì)胞壞死、脫落，顯露下方的纖維組織。
　　 結(jié)論:
　　 1.結(jié)扎家兔的股骨頭韌帶后，股骨頭組織切片可觀察到骨壞死的病理性改變。
　　 2.結(jié)扎家