黃鰭鯛和鱖魚胃蛋白酶原的分離純化與酶的性質(zhì)研究.pdf

本文以海水黃鰭鯛和淡水鱖魚為材料，通過硫酸銨鹽析、DEAE-Sephacel離子交換以及Sephacryl S-200凝膠過濾等方法首次分別從其胃內(nèi)純化得到四種胃蛋白酶原，并對該酶的相關(guān)性質(zhì)進(jìn)行了比較研究，為胃蛋白酶的開發(fā)利用提供實驗依據(jù)，也為這兩種極具經(jīng)濟價值魚類的消化生理研究打下基礎(chǔ)。 SDS-PAGE顯示純化得到四種黃鰭鯛的胃蛋白酶原(PG-I，PG-Ⅱ，PG-Ⅲ和PG-Ⅳ)的分子量分別為36，32，32以及34kDa；鱖魚的四種胃蛋白酶原(PG-I，PG-Ⅱ，PG-Ⅲ(a)及PG-Ⅲ(b))的分子量分別約為36，35，38以及34kDa。在pH2.0下，各胃蛋白酶原能在短時間內(nèi)轉(zhuǎn)化成為活性態(tài)的胃蛋白酶，它們的相對分子量均約為30kDa。 以酸變性牛血紅蛋白為底物，四種黃鰭鯛胃蛋白酶的最適pH為3.0-3.5，最適溫度為45-50℃。四種鱖魚的胃蛋白酶的最適pH為3.5，最適溫度為40-45℃。八種胃蛋白酶都屬于酸性蛋白酶(天冬氨酸蛋白酶)，pepstat In是它們的有效抑制劑，但抑制效果略有不同。四種黃鰭鯛胃蛋白酶對酸變性血紅蛋白的Km值分別為：8.7×10-8，1.0×10-7，8.6×10-8和7.3×10-8mOl/L，鱖魚的Km值分別為：2.3×10-7，1.2×10-7，2.4×10-8和1.3×10-7mOl/L。 以黃鰭鯛PG-I和PG-Ⅱ制得的一次抗體作WesternblOt顯示PG-Ⅱ能與黃鰭鯛四種蛋白酶都能發(fā)生強烈的免疫交叉反應(yīng)，而PG-I除與P-I能發(fā)生強烈反應(yīng)以及與P-Ⅱ有微弱反應(yīng)外，與其他兩種蛋白不反應(yīng)。分析鱖魚PG-I和PG-Ⅱ的N端前12個氨基酸序列，發(fā)現(xiàn)兩者的同源性達(dá)92％。