MST1在結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞增殖與凋亡中的作用.pdf

1、分類(lèi)號(hào)： 密級(jí)：U D C ： 學(xué)號(hào)：406529712350南 昌 大 學(xué) 碩 士 研 究 生學(xué) 位 論 文MST1 在結(jié)直腸癌 在結(jié)直腸癌 SW480 細(xì)胞增殖與凋亡中的作用 細(xì)胞增殖與凋亡中的作用Studies on the role of MST1 in the proliferation and apoptosis ofcolorectal cancer cells盧洪飛 盧洪飛培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院指導(dǎo)教師姓

2、名、職稱(chēng)：萬(wàn)福生 教授申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門(mén)類(lèi)：理學(xué)學(xué)科專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)論文答辯日期：2015 年 5 月 28 日答辯委員會(huì)主席： 王曼瑩評(píng)閱人： 鄭里翔謝小梅2015 年 6 月 10 日摘要II摘 要 摘 要哺乳動(dòng)物不育系 20 樣激酶 1/2( MST1/2) 是果蠅 hippo 基因在哺乳類(lèi)動(dòng)物中的同源基因 MST1/2 編碼的蛋白，也是哺乳動(dòng)物中 Hippo 信號(hào)通路的核心組分，具有調(diào)節(jié)器官大小、影響細(xì)胞增殖、凋亡及

3、抑制腫瘤生長(zhǎng)等功能。本實(shí)驗(yàn)從分子、細(xì)胞及動(dòng)物水平上探討 MST1 在結(jié)直腸癌中的作用及分子機(jī)制，旨在為結(jié)直腸癌的治療提供新的潛在靶點(diǎn)。方法： 方法：1、質(zhì)粒的雙酶切鑒定、純化及擴(kuò)增感 受 態(tài) 細(xì) 胞 擴(kuò) 增 及 AgeI 和 EcoRI 雙 酶 切 鑒 定 質(zhì) 粒 p-EGFP-MST1 和p-EGFP-N1。鑒定后進(jìn)行大量擴(kuò)增、純化及濃度的測(cè)定。2、 不同濃度、 時(shí)間5-FU對(duì)SW480細(xì)胞增殖及MST1、 Phospho-YAP1(

4、Ser127)、PUMA 等蛋白的影響不同濃度梯度、時(shí)間的 5-FU 處理 SW480 細(xì)胞，MTS 比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率， Western blot 檢測(cè)不同濃度 5-FU 對(duì) MST1、 YAP、 Phospho-YAP1(Ser127)、p73、p53、PUMA 和 caspase-3 蛋白表達(dá)的影響。3、MST1 對(duì) SW480 細(xì)胞作用的體外實(shí)驗(yàn)研究Western blot和RT-qPCR檢測(cè)3個(gè)siRNA干擾片段對(duì)SW4

5、80細(xì)胞MST1的沉默效率，篩選沉默效率高的片段。體外DNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染siRNA或p-EGFP-MST1至細(xì)胞或與5-FU共同處理SW480細(xì)胞， MTS比色法、 流式細(xì)胞術(shù)及Hoechst 33342染色法檢測(cè)高表達(dá)和沉默MST1對(duì)細(xì)胞增殖與凋亡的影響；RT-qPCR檢測(cè)MST1、yap、p73、p53、caspase3、CTGF和AREG的mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，Western blot方法檢測(cè)MST1、YAP、Phospho-YAP

6、1(Ser127)、p73、p53、PUMA和caspase-3蛋白表達(dá)情況，初步探討MST1在體外對(duì)SW480增殖及凋亡影響的分子機(jī)制及MST1表達(dá)與5-FU促進(jìn)細(xì)胞凋亡的關(guān)系。4、MST1 高表達(dá)對(duì)人結(jié)直腸癌 SW480 細(xì)胞鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響構(gòu)建 SW480 細(xì)胞的人結(jié)直腸癌裸鼠移植瘤模型，MST1 進(jìn)行基因治療或聯(lián)合 5-FU 共同治療，觀察移植瘤的生長(zhǎng)情況，免疫組化分析移植瘤中 MST1、Phospho-YAP1(Ser127