PANKL-RANK-OPG系統(tǒng)在感染松動(dòng)假體周圍骨溶解中的作用.pdf

1、RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)的失衡已被大量文獻(xiàn)證實(shí)與THA術(shù)后無菌性松動(dòng)引起的假體周圍骨溶解密切相關(guān)，但感染松動(dòng)引起的假體周圍骨溶解其發(fā)病機(jī)制則鮮見報(bào)道。本研究擬通過檢測RANKL/RANK/OPG信號(hào)通路在體外細(xì)胞和界膜組織中的表達(dá)情況，探討RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)是否與感染松動(dòng)引起假體周圍骨溶解的發(fā)病相關(guān)。
　　第一章 RANK在巨噬細(xì)胞中的表達(dá)
　　目的:探討凝血酶和UHMWPE顆粒處理后巨噬細(xì)胞中RANK

2、mRNA的表達(dá)差異。
　　方法:用佛波酯將U937單核細(xì)胞誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞，通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、免疫學(xué)標(biāo)志檢查及體外吞噬功能檢測等方法鑒定是否成功。將UHMWPE顆粒用球磨機(jī)研磨后進(jìn)行其直徑、性質(zhì)和內(nèi)毒素含量檢測。將誘導(dǎo)成功的巨噬細(xì)胞分別與凝血酶和制備好的UHMWPE顆粒共同培養(yǎng)，MTT法檢測凝血酶和UHMWPE顆粒對(duì)巨噬細(xì)胞的最佳濃度。將巨噬細(xì)胞分為細(xì)胞+凝血酶組、細(xì)胞+UHMWPE顆粒組和單純細(xì)胞組（對(duì)照組），實(shí)時(shí)熒光定量PCR

3、技術(shù)檢測RANK mRNA在三種巨噬細(xì)胞中的表達(dá)差異。
　　結(jié)果:U937單核細(xì)胞經(jīng)佛波酯處理后能成功被誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞，具備巨噬細(xì)胞的形態(tài)特征、表達(dá)特異的分化抗原CD14和較好吞噬能力。研磨后UHMWPE顆粒平均直徑約為8.46μm±6.30μm，內(nèi)毒素含量為0.053 EU/ml，符合實(shí)驗(yàn)要求。MTT法檢測凝血酶和UHMWPE顆粒對(duì)巨噬細(xì)胞的最佳濃度分別為50 U/ml和0.1 mg/ml。經(jīng)顆粒處理后的巨噬細(xì)胞，其RANK m

4、RNA的表達(dá)水平明顯高于其他兩組，P＜0.01，而凝血酶處理組RANK mRNA的表達(dá)水平也明顯高于對(duì)照組，P＜0.01。
　　結(jié)論:U937單核細(xì)胞能被佛波酯成功誘導(dǎo)為成熟的巨噬細(xì)胞。凝血酶處理后巨噬細(xì)胞中RANK mRNA的表達(dá)水平明顯升高，但RANK mRNA的升高水平不如UHMWPE顆粒處理后明顯。
　　第二章 RANKL、OPG在hFOB1.19成骨細(xì)胞中的表達(dá)
　　目的:探討凝血酶和UHMWPE顆粒處理后h

5、FOB1.19成骨細(xì)胞中RANKL和OPG mRNA的表達(dá)差異。
　　方法:將hFOB1.19成骨細(xì)胞分別與凝血酶和UHMWPE顆粒共同培養(yǎng)，MTT法檢測凝血酶和UHMWPE顆粒對(duì)巨噬細(xì)胞的最佳濃度。將hFOB1.19細(xì)胞分為細(xì)胞+凝血酶組、細(xì)胞+UHMWPE顆粒組和對(duì)照組，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測經(jīng)三組hFOB1.19細(xì)胞中RANKL、OPG mRNA的表達(dá)差異及RANKL/OPG的表達(dá)比率。
　　結(jié)果:MTT法檢測凝

6、血酶和UHMWPE顆粒對(duì)hFOB1.19細(xì)胞的最佳濃度分別為50 U/ml和0.1 mg/ml。經(jīng)顆粒處理后的hFOB1.19細(xì)胞，其RANKL和OPG mRNA的表達(dá)水平均明顯高于其他兩組，P＜0.01，而凝血酶處理組RANKL和OPG mRNA的表達(dá)水平也明顯高于對(duì)照組，P＜0.01。RANKL/OPG比率，顆粒處理組同樣高于其他兩組，但凝血酶處理組與對(duì)照組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:UHMWPE顆粒處理hF

7、OB1.19細(xì)胞后，RANKL、OPGmRNA表達(dá)明顯升高，RANKL/OPG比率增加。凝血酶處理hFOB1.19細(xì)胞后能促進(jìn)細(xì)胞RANKL、OPG mRNA的表達(dá)，但作用不如UHMWPE顆粒明顯。
　　第三章 RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)在感染界膜中的表達(dá)
　　目的:探討RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)在感染界膜、無菌性松動(dòng)界膜和正?；ぶ械谋磉_(dá)差異。
　　方法:收集17例感染界膜組織、26例無菌性松動(dòng)界膜組織及

8、12例正常滑膜組織，用掃描電鏡及透射電鏡對(duì)三種組織進(jìn)行微觀形態(tài)的觀察。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測三種組織中RANKL、RANK和OPG mRNA的表達(dá)差異，用免疫組化法和Western-blot法檢測三種組織中RANKL、RANK和OPG蛋白的表達(dá)差異。
　　結(jié)果:三種組織的微觀形態(tài)有明顯差異，掃描電鏡可見無菌性松動(dòng)界膜表面廣泛分布磨損顆粒，感染界膜在透射電鏡下中可見到桿菌的存在。無菌性松動(dòng)界膜組織中RANKL、RANK及OPG

9、 mRNA的表達(dá)均明顯高于其他兩組，P＜0.01。感染界膜中RANKL mRNA的表達(dá)較其在正常滑膜中上調(diào)，P＜0.05;但RANK、OPG mRNA在這兩種組織中的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。RANKL/OPG比率，無菌性松動(dòng)界膜組(P＜0.01)與感染界膜組(P＜0.05)的RANKL/OPG比率均高于正?；そM。無菌性松動(dòng)界膜組織中RANKL、RANK蛋白的表達(dá)均明顯高于其他兩組，P＜0.01。感染界膜中RANKL蛋白的表達(dá)較