E1B-55KD基因缺陷腺病毒H101對膠質母細胞瘤U251體外抑制作用的實驗研究.pdf

1、目的：膠質母細胞瘤是人類顱內惡性程度最高的腫瘤，多發(fā)于成年人，好發(fā)于40-50歲男性，腫瘤生長迅速，常在白質內呈浸潤方式生長。常規(guī)的治療為手術切除為主，術后放療或合并應用化療，但由于腫瘤邊界不清，術中難以完全清除，一般在8個月后復發(fā)，生存時間平均1年左右。基因療法是一種全新概念的治療方法，它根據瘤細胞與正常細胞內分子機制的不同而設計選擇性的使目的細胞死亡的治療方法，其中條件復制的基因缺失型溶瘤腺病毒H101(國外同類制劑為Onvx-O1

2、5或d11520)是目前研究比較多的基因療法之一，它根據腫瘤細胞和正常細胞p53途徑的不同而設計，切除人類5型腺病毒結合宿主細胞p53蛋白的E1B-55KD片段，使得這種基因改良腺病毒不能在p53陽性的正常細胞內復制，而能夠選擇性的在p53途徑缺失的腫瘤細胞內復制，并且最終溶解腫瘤細胞并散布子代病毒繼續(xù)感染其它腫瘤細胞，發(fā)揮其“旁觀者”效應。目前H1O1類生物制劑在除外腦部腫瘤的其它體內腫瘤單獨或聯(lián)合放化療的臨床前及臨床實驗已經開展，包

3、括頭頸部腫瘤、口腔癌、消化系統(tǒng)腫瘤、肺癌、前列腺癌等等，都已開展了Ⅰ-Ⅲ期的臨床實驗，并取得了令人鼓舞的結果。但大多學者對其應用在神經腫瘤領域還是存在質疑，主要原因是H101腺病毒對正常神經元的毒性以及是否會引發(fā)由腺病毒所致的腦炎及腦水腫癥狀。本課題的目的在于檢測H101對體外培養(yǎng)的正常的海馬神經元的毒性反應及初步檢測H101對體外培養(yǎng)的膠質母細胞瘤U251的抑制率。 方法：本實驗選用的膠質母細胞瘤為p53陰性的U251，由同本

4、細胞庫建系并保存，原代培養(yǎng)12天的新生大鼠海馬神經元作為正常細胞對照組，海馬神經元用神經元特異性MAP-2抗體進行鑒定，分別應用細胞毒性實驗(MTT)、細胞病變反應實驗(CPE)檢測不同滴度的H101對瘤細胞及神經元的抑制率及毒性，應用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測H101mRNA在不同的時間點(24h、48h、72h)在膠質瘤細胞及神經元內的表達水平，對差異顯著性進行T檢驗。結果：1．H101病毒在24小時就可以對體外培養(yǎng)的膠

5、質母細胞瘤U251產生抑制作用，加入的病毒滴度越大抑制率越高，并且隨著病毒作用時間的延長，細胞病變反應越發(fā)明顯，H101mRNA的表達呈上升趨勢。2．H101病毒不能在體外培養(yǎng)的原代大鼠海馬神經元內有效復制，海馬神經元不出現細胞病變反應，不同病毒滴度組的海馬神經元與對照組相比抑制率沒有統(tǒng)計學差異(P>0.05)，三個時間點檢測不到病毒H101mRNA的表達。 結論：1．溶瘤病毒制劑H101對體外培養(yǎng)的人類膠質母細胞瘤U251存在