腦梗死與EC-SOD基因甲基化相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：
　　 腦血管疾病是目前患病率、死亡率、致殘率最高的疾病之一，其中缺血性腦血管疾病，即腦梗死(cerebral infarction，CI)，約占全部腦血管疾病的60％～80％。腦組織缺血后會(huì)發(fā)生一系列損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)，包括鈣穩(wěn)態(tài)失衡、氧化應(yīng)激損傷、興奮性氨基酸毒性作用、線粒體功能障礙等，以及蛋白酶激活、基因表達(dá)改變，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或壞死。表觀遺傳學(xué)是指在基因序列不變的前提下，基因的表達(dá)發(fā)生了變化，為環(huán)境和基因相互作用的

2、結(jié)果，包括DNA甲基化、組蛋白修飾、染色質(zhì)重塑、非編碼RNA調(diào)控等。超氧化物歧化酶(SOD)是一種抗氧化酶，資料顯示在腦梗死患者中呈降低趨勢。SOD基因甲基化修飾會(huì)影響SOD的表達(dá)，但是關(guān)于人類外周血中的細(xì)胞外超氧化物歧化酶（extracellular superoxide dismutase，EC-SOD）基因甲基化程度與腦梗死的關(guān)系，國內(nèi)外尚無相關(guān)報(bào)道。本研究旨在觀察人外周血中，EC-SOD基因甲基化程度是否與腦梗死相關(guān)，能否成為診

3、斷該疾病的檢測指標(biāo)之一。
　　 研究目的：
　　 應(yīng)用病例-對(duì)照研究方法探討EC-SOD基因甲基化程度與腦梗死相關(guān)性。
　　 研究方法：
　　 采用病例-對(duì)照方法進(jìn)行研究。病例組隨機(jī)選自2010年9月至2011年2月在山東大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科的住院患者，共83例，男性45例，女性38例，年齡最大者為83歲，年齡最小者為41歲，平均年齡61.60±9.73歲。入選病例均符合1995年全國第4次腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)

4、議所制定的缺血性腦血管病診斷標(biāo)準(zhǔn)，顱腦MRI或CT證實(shí)為腦梗死，無意識(shí)障礙或僅有輕度意識(shí)障礙，能夠配合醫(yī)師查體；并排除嚴(yán)重肝腎疾病，內(nèi)分泌代謝疾病，結(jié)締組織疾病，腫瘤，生命體征不平穩(wěn)，合并其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病及心房纖顫的患者。正常對(duì)照組隨機(jī)選自同期山東大學(xué)第二醫(yī)院清河社區(qū)健康查體者，共94例，男性52例，女性42例，年齡最大者為85歲，年齡最小者為48歲，平均年齡61.67±6.98歲。兩組年齡、性別均匹配。
　　 采用甲基化特異性

5、PCR(methylation-specific PCR，MSP)檢測EC-SOD甲基化程度，并分析其與腦梗死的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 1．本研究共選取了83例腦梗死患者及94例正常對(duì)照者，兩組年齡、性別無顯著性差異(P＞0.05)。腦梗死組與正常對(duì)照組相比較，無顯著性差異的因素有體重指數(shù)(BMI)、舒張壓(DBP)、空腹血糖(FBG)；增高的因素有吸煙史、飲酒史、葷食者比例、腰圍、高血壓史、糖尿病史、收縮壓(SB

6、P)、心率(HR)、甘油三酯(TG)水平；降低的因素有運(yùn)動(dòng)量、總膽固醇(CHOL)水平。
　　 2．EC-SOD基因存在三種甲基化模式，包括完全甲基化、部分甲基化及未甲基化。腦梗死組中完全甲基化者4例，部分甲基化者21例，未甲基化者58例，甲基化率為30.12％。正常對(duì)照組中完全甲基化者9例，部分甲基化者41例，未甲基化者44例，甲基化率為53.19％。兩組甲基化有顯著性差異(P＜0.05），腦梗死組EC-SOD基因甲基化率低于

7、正常對(duì)照組。
　　 3．將腦梗死組按照梗死范圍，分為大面積腦梗死組和小面積腦梗死組。正常對(duì)照組94例，小面積腦梗死組58例，大面積腦梗死組25例。
　　 正常對(duì)照組中未甲基化者44例，甲基化者50例，甲基化率為53.19％;小面積腦梗死組中未甲基化者有33例，甲基化者有25例，甲基化率為43.10％;大面積腦梗死組中未甲基化者有25例，甲基化者有0例，甲基化率為0％。三組甲基化程度有顯著性差異(P＜0.05）。
　

8、　 三組兩兩比較發(fā)現(xiàn)：小面積腦梗死組與正常對(duì)照組EC-SOD甲基化無顯著性差異（P＞0.05）；大面積腦梗死組與正常對(duì)照組甲基化有顯著性差異(P＜0.05)，大面積腦梗死組低于正常對(duì)照組；大面積腦梗死組與小面積腦梗死組甲基化有顯著性差異(P＜0.05)，大面積腦梗死組低于小面積腦梗死組。
　　 4.分析腦梗死各項(xiàng)相關(guān)因素與EC-SOD基因甲基化的關(guān)系。
　　 (1)將正常對(duì)照者及腦梗死患者分別按年齡分組。
　　

9、 正常對(duì)照者中，高年齡組共49例，未甲基化者16例，部分甲基化者28例，完全甲基化者5例，甲基化率為67.34％;低年齡組共45例，未甲基化者28例，部分甲基化者13例，完全甲基化者4例，甲基化率為37.78％。兩組甲基化程度有顯著性差異（P＜0.05），高年齡組EC-SOD甲基化程度高于低年齡組。
　　 腦梗死患者中，高年齡組共41例，未甲基化者22例，部分甲基化者16例，完全甲基化者3例，甲基化率為46.34％;低年齡組共4

10、2例，未甲基化者36例，部分甲基化者5例，完全甲基化者1例，甲基化率為14.28％。兩組甲基化程度有顯著性差異（P＜0.05），高年齡組EC-SOD甲基化程度高于低年齡組。
　　 (2)按照性別、頸動(dòng)脈粥樣硬化程度、腦動(dòng)脈硬化情況、是否伴代謝綜合征、Hcy水平等分組比較EC-SOD甲基化程度時(shí)，未發(fā)現(xiàn)有顯著性差異(P＞0.05)。
　　 5．將腦梗死組按照甲基化程度分組比較NIHSS評(píng)分及Barthel指數(shù)。未甲基化組、

11、部分甲基化組及完全甲基化組的NIHSS評(píng)分分別為2.95±3.38，1.05±1.43，0.75±0.50，三組相比具有顯著性差異(P＜0.05)。未甲基化組、部分甲基化組及完全甲基化組的Barthel指數(shù)分別為84.91±20.91，94.05±11.25，96.25±4.78，三組相比無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1．腦梗死組與正常對(duì)照組相比，EC-SOD基因甲基化率較低，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

12、，推測EC-SOD基因甲基化程度與腦梗死相關(guān)。
　　 2．與正常對(duì)照組相比，大面積腦梗死組甲基化率低；大面積腦梗死組甲基化率低于小面積腦梗死組。故推測EC-SOD基因甲基化狀態(tài)與梗死灶范圍相關(guān)，且梗死灶范圍越大，EC-SOD基因甲基化率越低。
　　 3．EC-SOD基因甲基化狀態(tài)與年齡相關(guān)，且年齡越大EC-SOD基因甲基化率越高。未發(fā)現(xiàn)性別、頸動(dòng)脈粥樣硬化程度、腦動(dòng)脈硬化情況、代謝綜合征、Hcy水平與EC-SOD基因甲基