乙型肝炎病毒X蛋白的結構生物學研究.pdf

1、乙型病毒性肝炎是全世界最嚴重的公共衛(wèi)生疾病之一,是由嗜肝DNA病毒科乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)引起,HBV的慢性感染是肝癌的主要原因之一。HBV的DNA是部分單鏈的雙鏈結構,完整的負鏈有四個開放閱讀框(open reading frame,ORF),其中X-ORF編碼的X蛋白(HBx)是乙肝病毒感染周期中基本的病毒蛋白,HBx大部分位于細胞質(zhì)內(nèi),少量位于細胞核。HBx通過與細胞內(nèi)其他蛋白質(zhì)的相互作用以及激

2、活細胞內(nèi)的信號傳導通路發(fā)揮反式激活功能,從轉(zhuǎn)錄水平激活細胞內(nèi)生長調(diào)節(jié)基因、調(diào)節(jié)細胞凋亡、抑制受損DNA的修復等方面直接或間接地損害宿主細胞,導致肝細胞凋亡、壞死甚至癌變。
　　 不同于以往大多數(shù)僅限于HBx功能的研究,本論文采用結構生物學方法研究HBx,以期能夠從結構生物學的角度闡述HBx通過與其它蛋白相互作用發(fā)揮反式激活功能的分子機制,為藥物設計和其它生物學功能的研究奠定基礎。
　　 本課題主要通過分子克隆技術,將HB

3、x構建到原核表達載體中。采用原核表達系統(tǒng),通過改變表達載體、改變基因序列的長度、定點突變、改變表達菌株、改變誘導劑濃度和改變誘導溫度等表達條件的優(yōu)化,最終得到可溶的目的蛋白。主要使用親和層析和凝膠過濾層析對目的蛋白進行純化,優(yōu)化緩沖液提高蛋白的穩(wěn)定性,最后采用氣相擴散法對目的蛋白進行結晶條件的初篩和優(yōu)化。
　　 經(jīng)過對表達條件和純化方案的摸索,目前已經(jīng)得到純度較高、濃度為8mg/ml的目的蛋白。將蛋白進行晶體初篩的實驗后,得到一