小鼠microRNA130a-b的轉(zhuǎn)錄調(diào)控和功能研究.pdf

1、MicroRNA(miRNA)是真核生物中位于非編碼區(qū)的一類小RNA，他們在各種疾病和生理過程中起著非常重要的作用。其中miR-130a/b對白血病、脂肪生成等重要生理過程具有調(diào)控作用。然而，miR-130a/b的轉(zhuǎn)錄調(diào)控以及其在代謝和炎癥方面的功能目前還遠未研究清楚。
　　本實驗采用細胞轉(zhuǎn)染、雙熒光素酶報告系統(tǒng)、基因定點突變、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)、熒光定量PCR、小鼠腹腔注射等實驗技術(shù)，對miR-130a/b的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機

2、制進行了研究。我們發(fā)現(xiàn)C/EBPα可直接作用于miR-130a/b的啟動子來調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)錄活性。取得的主要結(jié)果如下:
　　1、克隆了小鼠miR-130a/b的啟動子序列，并將它們構(gòu)建于PGL3-Basic載體中。在BHK21細胞系中驗證其啟動子活性;
　　2、通過熒光活性分析證實了C/EBPα對miR-130a的啟動子活性具有顯著的抑制作用，而對于miR-130b的啟動子活性有顯著性的上調(diào);
　　3、突變和ChIP實驗確定

3、了C/EBPα對miR-130a/b的關(guān)鍵作用位點和二者的直接相互結(jié)合;
　　4、功能研究上，驗證了miR-130a/b對3T3-L1細胞在成脂分化過程中的表達量顯著下降，在穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞中證實了miR-130a/b對TNFα和SP1的抑制作用。在活體研究中發(fā)現(xiàn)LPS處理導(dǎo)致miR-130a/b在腹腔巨噬細胞中的表達水平下降，并使附睪脂肪組織中miR-130b顯著性上調(diào)。
　　總之，本文證實了C/EBPα對miR-130a啟動子活