雞肝臟microRNA-122表達(dá)調(diào)控機(jī)制和功能研究.pdf

1、MicroRNA是一類(lèi)單鏈小分子非編碼RNA，在基因轉(zhuǎn)錄后水平通過(guò)和靶mRNA的堿基配對(duì)導(dǎo)致翻譯抑制或mRNA降解，參與器官的發(fā)育、細(xì)胞的分化、增殖、凋亡等多種生物學(xué)過(guò)程，且和多種疾病密切相關(guān)。miR-122是在肝臟中高表達(dá)的miRNA，在肝臟的生長(zhǎng)發(fā)育、脂類(lèi)代謝等過(guò)程發(fā)揮重要作用，它的異常表達(dá)還跟肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。本研究以雞miR-122為研究對(duì)象，對(duì)其表達(dá)調(diào)控機(jī)制和功能方面進(jìn)行了研究，結(jié)果如下：
　　(1)運(yùn)用生物信息學(xué)

2、分析和5’RACE方法確定了雞miR-122的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)位于pre-miR-122上游的3294(chrZ:757760)位置，用序列刪除技術(shù)證明雞miR-122核心啟動(dòng)子區(qū)位于pre-miR-122上游3.8~3.2 kb區(qū)域。
　　(2)為了研究雞miR-122的表達(dá)調(diào)控機(jī)制，我們預(yù)測(cè)到在雞miR-122的啟動(dòng)子區(qū)含有轉(zhuǎn)錄因子HNF3β的結(jié)合位點(diǎn)，將這個(gè)位點(diǎn)突變后能明顯降低miR-122的啟動(dòng)子活性，用EMSA研究發(fā)現(xiàn)HNF

3、3β能夠在體外和雞miR-122的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合，推測(cè)HNF3β能結(jié)合該位點(diǎn)激活miR-122的轉(zhuǎn)錄。
　　(3)通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)證明 VNN1和 BZW2是miR-122的靶基因，靶位點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)證明VNN1和BZW2基因的3’UTR與miR-122種子區(qū)的互補(bǔ)位點(diǎn)為靶位點(diǎn)。
　　(4)將miR-122在LMH細(xì)胞中過(guò)表達(dá)后，發(fā)現(xiàn)靶基因BZW2 mRNA表達(dá)水平顯著下降，VNN1 mRNA表達(dá)水平?jīng)]有顯著

4、變化。利用LNA-antimiR-122抑制雞肝臟原代細(xì)胞中的miR-122后，miR-122的靶基因VNN1和BZW2 mRNA表達(dá)水平都呈顯著性上升。結(jié)果表明靶基因BZW2在mRNA水平上受到miR-122的負(fù)性調(diào)控，而VNN1在mRNA水平上不受到miR-122的調(diào)控。
　　(5)靶基因VNN1在不同組織中的表達(dá)特征跟miR-122的表達(dá)特征相一致，都是在雞肝臟中表達(dá)量最高，其次是肺，在脾、腎、脂肪中微量表達(dá)，在其他組織中表