水產(chǎn)品中耐藥性致病副溶血性弧菌的預(yù)測模型建立.pdf

1、副溶血性弧菌是一種革蘭氏陰性的嗜鹽性食源性致病菌，隸屬弧菌科中的弧菌屬，廣泛存在于海水、海底沉積物等環(huán)境和蝦、蟹、貝類等各種海產(chǎn)品中。是引起沿海地區(qū)食物中毒爆發(fā)的常見的病原菌之一，能夠引起傷口感染、敗血癥、腹瀉、頭痛和急性胃腸炎等疾病。副溶血性弧菌食物中毒事件常因食用被污染的生鮮、未充分煮熟或被交叉污染的水產(chǎn)品引起。在沿海地區(qū)溫度較高月份極易引發(fā)由副溶血性弧菌引起的集體性食物中毒事件，且已超過沙門氏菌引起的食物中毒事件，由此引起全球?qū)Υ?/p>

2、食源性致病菌副溶血性弧菌的極大關(guān)注?？股赝ǔ１徽J(rèn)為是治療此類疾病的良好藥劑，但隨著抗生素的大量使用該菌的耐藥株不斷增加，而耐藥性的問題日益嚴(yán)重，尤其是食源性致病菌產(chǎn)生耐藥性后，會給臨床治療帶來極大的困難，對人類健康造成嚴(yán)重危害。對分離的副溶血性弧菌菌株進行耐藥性分析，能夠為降低藥物殘留及食源性疾病的控制提供參考依據(jù)。本文從上海市水產(chǎn)品中致病性副溶血性弧菌的普查、耐藥性和敏感性副溶血性弧菌的生長特性比較，耐藥性致病性副溶血性弧菌在南美白

3、對蝦中的預(yù)測模型建立等幾個方面對耐藥性致病性副溶血性弧菌的生長特性展開了系統(tǒng)的研究。具體研究如下：
　　第一部分：改良K-B法用于副溶血性弧菌耐藥性檢測
　　K-B紙片法是最為廣泛的細(xì)菌藥敏測定方法之一，本文針對常見的食源性致病菌副溶血性弧菌，對K-B紙片法進行優(yōu)化和改良。通過建立OD-菌數(shù)對應(yīng)公式以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的麥?zhǔn)媳葷岱椒ǎ⒏鶕?jù)抑菌圈判別結(jié)果的差異，選擇了標(biāo)準(zhǔn)一次性平皿（9 cm×9 cm），同時對比3種不同的涂布方法，得

4、出定量300μ L棉拭子涂布方法變異系數(shù)（CV）最小，最后通過8株野生副溶血性弧菌的耐藥性檢測，表明改良K-B法與傳統(tǒng)方法的實驗結(jié)果基本保持一致。從而建立了一種更高效、更快捷的細(xì)菌耐藥性測量方法，可應(yīng)用于副溶血性弧菌的耐藥性檢測。
　　第二部分：上海市售水產(chǎn)品中致病性副溶血性弧菌的耐藥性及其分子分型
　　副溶血性弧菌在中國屬于暴發(fā)嚴(yán)重的食源性致病菌之一，它能夠引起急性腸胃炎。本文的目的是調(diào)查致病性副溶血性弧菌的耐藥性及其基因

5、型關(guān)系。我們于2011年3月到2012年12月從上海零售市場中進行樣品的采集。共采集了352份水產(chǎn)樣品品，其中248份蝦樣品，86份貝類和18份魚類，分離鑒定獲得41株致病性副溶血性弧菌，對其進行耐藥性的測定和分子分型的分析。在副溶顯色培養(yǎng)基初篩后，挑選的菌株進一步通過PCR擴增tlh，tdh，trh基因驗證，最終獲得41株tdh陽性的副溶血性弧菌。另外，致病性菌株O3:K6(Vp2)和ATCC33847(Vp1)作為對照。耐藥性檢測結(jié)

6、果顯示，這些致病性菌株均對氯霉素敏感，14.63％對阿米卡星具有抗性，對阿莫西林-克拉維酸，慶大霉素，環(huán)丙沙星，左氧氟沙星具有不同程度的抗性。通過ERIC-PCR(腸桿菌基因間重復(fù)序列聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))分析將這些致病性菌株分成6種圖譜型?？傊?，副溶血性弧菌是在水產(chǎn)市場中常見的致病菌，并且有些的菌株是致病性的并且耐藥的菌株，這可能對人類健康帶來潛在的風(fēng)險。
　　第三部分：不同耐藥性致病副溶血性弧菌的生長特性比較研究
　　用K-B

7、紙片擴散法分析了8株致病性副溶血性弧菌菌株對10種抗生素的耐藥性，發(fā)現(xiàn)6株菌株具有耐藥性，其中，1株耐3種抗生素，1株耐2種抗生素，其余4株耐1種抗生素。比較了20、25、37℃下這8株菌株在TSB（含3%NaCl，pH8.0）中的生長特性。通過Bioscreen全自動微生物生長曲線分析儀建立了這8株菌的一級生長模型，并比較其最大比生長速率（μmax）,延滯期（λ）及最大生長量（a）。同時比較了這8株菌的ERIC-PCR圖譜的差異性。結(jié)

8、果顯示，不同耐藥性致病性副溶血性弧菌菌株的生長參數(shù)存在一定的差異性，但是菌株的各個生長參數(shù)的大小與菌株的耐藥性之間沒有明顯的對應(yīng)關(guān)系。并且發(fā)現(xiàn)ERIC-PCR圖譜與菌株的耐藥性之間也沒有明顯的對應(yīng)關(guān)系。本研究為耐藥性致病副溶血性弧菌的風(fēng)險評估提供參考依據(jù)。
　　第四部分：三株不同的耐藥性致病副溶血性弧菌在南美白對蝦中一級預(yù)測模型的建立
　　為了探討不同耐藥性致病副溶血性弧菌在南美白對蝦中的生長動力學(xué)參數(shù)的差異。測定了4℃、7

9、℃、10℃、15℃、20℃、25℃和30℃條件下三株不同耐藥性致病性副溶血性弧菌：Vp18（耐6種抗生素）、Vp57（耐3種抗生素）、Vp43(耐1種抗生素)在南美白對蝦中的生長曲線。采用了一級模型：生長模型(三階段線性模型)和失活模型(線性模型)進行擬合，經(jīng)過origin8.0軟件擬合，結(jié)果顯示，擬合的R2均在0.9以上(4℃Vp43的線性擬合R2為0.87)，表明擬合效果良好。對獲得的不同溫度下的生長參數(shù)進行比較，結(jié)果表明，在15℃