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1、目的:觀察不同濃度羅哌卡因長(zhǎng)時(shí)間間斷鞘內(nèi)注射對(duì)大鼠脊髓超微結(jié)構(gòu)以及Bax和Bcl-2表達(dá)的影響,探討線粒體凋亡途徑是否參與了羅哌卡因脊髓神經(jīng)毒性的細(xì)胞凋亡,為羅哌卡因在臨床蛛網(wǎng)膜下腔阻滯中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法:體重280±16g的雄性SD大鼠72只,按改良Yaksh法成功置入microspinal導(dǎo)管。隨機(jī)分為生理鹽水組(N組,n=18)和羅哌卡因組(R組,n=54),R組又分為三個(gè)不同濃度組,即分別經(jīng)microspina
2、l導(dǎo)管注入濃度為0.5%,0.75%,1%的羅哌卡因0.12ul/kg,分別記為R1組(n=18),R2組(n=18),R3組(n=18),每一濃度組又分為6h,12h,24h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)組。每組間隔給藥時(shí)間均為1.5個(gè)小時(shí)。觀察注藥后的運(yùn)動(dòng)恢復(fù)時(shí)間和機(jī)械痛閾、熱痛閾改變。于注藥6h,12h和24h各組處死6只大鼠取脊髓腰膨大,隨機(jī)取出1mm3脊髓后角組織和神經(jīng)根后固定行透射電鏡觀察脊髓、神經(jīng)根早期超微結(jié)構(gòu)變化,剩余脊髓及神經(jīng)根進(jìn)行免疫組
3、化分析。 結(jié)果: 1.R3組的各時(shí)間點(diǎn)組大鼠雙下肢肌張力恢復(fù)均較R1,R2組減慢,各組各時(shí)間點(diǎn)之間比較無(wú)差異。 2.HE染色光鏡下R3組的12h,24h組可看到后角白質(zhì)出現(xiàn)空泡現(xiàn)象,細(xì)胞間質(zhì)水腫,神經(jīng)細(xì)胞核固縮,核周間隙增寬。N組電鏡結(jié)果示正常,R1,R2組超微結(jié)構(gòu)的主要改變?yōu)榫€粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度水腫,R1的24h組,R2的12h和24h組部分有髓纖維板層結(jié)構(gòu)疏松,可見(jiàn)軸索腫脹,局灶變性,R3組的改變則明顯嚴(yán)重,各
4、時(shí)間點(diǎn)均可見(jiàn)神經(jīng)元細(xì)胞核膜皺縮,呈花邊樣改變,大多數(shù)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹嚴(yán)重,線粒體空泡樣變,還可見(jiàn)局灶性脫髓鞘改變,軸索變性或消失,細(xì)胞間質(zhì)水腫明顯,且以24h組為甚。 3.N組Bax和Bcl-2均有少量表達(dá),染色淡,R1和R2組的Bax表達(dá)在6小時(shí)開(kāi)始增加,12小時(shí)后增高明顯,到24小時(shí)一直呈上升趨勢(shì),但同期Bcl-2也在增高,Bcl-2/Bax比值與生理鹽水組比較無(wú)顯著性差異。R3組的Bax表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)高于其它三組,Bcl-2
5、表達(dá)低于R1,R2組,Bcl-2/Bax比值亦低于其它三組。 結(jié)論: 1.0.5%,0.75%的羅哌卡因24小時(shí)鞘內(nèi)間斷注射下大鼠產(chǎn)生了線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度腫脹的脊髓超微結(jié)構(gòu)改變,并呈劑量和濃度依賴性。而1%的羅哌卡因鞘內(nèi)間斷注射6小時(shí)可產(chǎn)生脊髓毒性改變。 2.1%羅哌卡因長(zhǎng)時(shí)間鞘內(nèi)間斷注射下脊髓Bax表達(dá)在6小時(shí)開(kāi)始增加,到24小時(shí)一直呈升高趨勢(shì),脊髓毒性改變與Bcl-2/Bax比值相關(guān),提示羅哌卡因脊髓毒性可能
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