多通道二維色譜分離松多酚及對抗氧化物質(zhì)的活性跟蹤.pdf

1、二維色譜是分離、分析復(fù)雜組分物質(zhì)的最有效方法之一,有著傳統(tǒng)分離技術(shù)無法比擬的優(yōu)點,能快速、有效地將復(fù)雜組分分離成單一組分物質(zhì),但是其分離純化量少,多應(yīng)用于微量物質(zhì)的分析鑒定,欠缺制備方面研究和應(yīng)用。因此本課題組在二維色譜和傳統(tǒng)柱色譜的基礎(chǔ)上,設(shè)計構(gòu)建了多通道二維色譜分離設(shè)備,研究其在制備方面的應(yīng)用。本文以多通道二維色譜為研究基礎(chǔ),以松多酚為研究對象,系統(tǒng)的研究了多通道二維色譜分離松多酚的工藝條件、多通道二維色譜對松多酚抗氧化物質(zhì)的活性跟

2、蹤以及其抗氧化功能研究。研究的主要內(nèi)容如下:
　　根據(jù)多通道二維色譜的設(shè)計原理,成功構(gòu)建了多通道二維色譜分離設(shè)備;然后以藍莓果渣為原料,采用兩種不同規(guī)格的色譜柱進行多通道二維色譜分離效果的驗證實驗,結(jié)果顯示,較藍莓果渣提取液,多通道二維色譜分離的藍莓花色苷的純度有很大提高,最大提高了8.59倍,可推知多通道二維色譜對天然植物活性物質(zhì)具有分離能力。
　　以紅松松塔為原料,選取固相介質(zhì)、洗脫劑、上樣量、上樣濃度、洗脫速度以及色譜

3、柱數(shù)量6個因素為研究對象,對多通道二維色譜分離松多酚的條件進行優(yōu)化。通過靜態(tài)吸附和解吸實驗,確定了吸附和解吸效果均佳的X-5大孔樹脂作為固相介質(zhì),解吸效果最優(yōu)的0.5％甲酸-60%乙醇溶液為洗脫劑。然后,利用多通道二維色譜設(shè)備進行單因素動態(tài)實驗及響應(yīng)面優(yōu)化實驗,確定上樣量、上樣濃度、洗脫速度和色譜柱數(shù)量4個因素的最佳值,結(jié)果分別為260mg、2.0mg/mL、200±20ml/min和4色譜柱聯(lián)用。此條件下,多通道二維色譜分離設(shè)備對多酚

4、的分離有著很好的效果,使松多酚純度由2.37%提高到了20.36%,純化倍數(shù)高達8.59倍。
　　采用MTT法測定總還原能力最強組分和羥自由基清除能力最佳組分對小鼠脾細胞的增殖作用,結(jié)果顯示,兩抗氧化組分對小鼠脾細胞具有促增殖作用,總還原能力最強組分在5.0ug/ml濃度時,脾細胞的增殖率最高,可達15%左右;羥自由基清除能力最強組分在20ug/ml濃度時,脾細胞增殖率最好,可達10%。
　　采用H2O2誘導(dǎo)法構(gòu)建小鼠脾細胞

5、氧化損傷模型,在氧化損傷防護實驗中,兩抗氧化組分對脾細胞氧化損傷均具有一定的防護作用,總還原能力最強組分在高劑量(160ug/ml)時對脾細胞氧化損傷的防護效果最佳,而羥自由基清除能力最佳組分在中劑量(40ug/ml)時效果最佳。在修復(fù)實驗中,2種抗氧化組分均在中劑量時對脾細胞氧化損傷的修復(fù)效果較佳,高、低劑量對脾細胞氧化損傷沒有明顯的修復(fù)作用。同時在成分分析中,2種抗氧化組分的活性成分多酚、黃酮和花青素的含量比分別為250:75:7和