PGAM2基因啟動(dòng)子區(qū)變異鑒定及其與豬肉系水力的相關(guān)性研究.pdf

1、系水力(water holding capacity, WHC)是指豬肉在施加外力的條件下保持水分的能力，是衡量豬肉質(zhì)性狀的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。提高系水力可以避免豬肉中水分的大量流失，減少生產(chǎn)者在經(jīng)濟(jì)利益上的損失，同時(shí)可以改善豬肉的品質(zhì)和風(fēng)味。糖酵解途徑是影響系水力高低的關(guān)鍵因素之一，磷酸甘油酸變位酶(phosphoglycerate mutase，PGAM2)、磷酸化酶激酶(phosphorylase kinase gamma1，PHKG1

2、)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase A，LDHA)基因編碼糖酵解途徑中的關(guān)鍵酶，并且研究表明這三個(gè)基因與多個(gè)肉質(zhì)性狀密切相關(guān)，它們可能通過(guò)糖酵解途徑影響到系水力。因此，本實(shí)驗(yàn)以PGAM2、PHKG1和LDHA基因作為候選基因，篩選啟動(dòng)子區(qū)的單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism，SNP)位點(diǎn)，研究基因啟動(dòng)子區(qū)SNP位點(diǎn)對(duì)基因表達(dá)水平的影響，及其與系水力的相關(guān)性，旨在尋找與系水

3、力相關(guān)的分子遺傳標(biāo)記。
　　本實(shí)驗(yàn)首先選取了系水力高組和低組各14個(gè)樣品，通過(guò)對(duì)三個(gè)候選基因表達(dá)水平的分析，發(fā)現(xiàn)PGAM2和PHKG1基因的表達(dá)與系水力水平呈負(fù)相關(guān)(p＜0.05)。將高組和低組的DNA樣品進(jìn)行混池，通過(guò)比較測(cè)序，在PGAM2啟動(dòng)子區(qū)發(fā)現(xiàn)一個(gè)突變位點(diǎn)c.-360 T＞C，其等位基因在高組和低組之間的分布呈顯著差異。
　　通過(guò)等位基因特異性PCR技術(shù)(AS-PCR)對(duì)PGAM2基因c.-360 T＞C位點(diǎn)在17

4、0頭三元雜交豬中進(jìn)行了基因分型，獲得CC，TT和CT三種基因型。統(tǒng)計(jì)分析表明，CC型個(gè)體的系水力顯著低于TT型個(gè)體(p＜0.05)?；虮磉_(dá)分析表明，CC型個(gè)體PGAM2基因表達(dá)水平顯著高于TT型個(gè)體(p＜0.05)。通過(guò)雙熒光素酶活性分析同樣顯示，CC型的啟動(dòng)子活性顯著高于TT型(p＜0.05）。通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)SNP位點(diǎn)c.-360C可以結(jié)合CREB，TAXCREB和v-Maf三種轉(zhuǎn)錄因子，c.-360T可以結(jié)合LTSM一種轉(zhuǎn)