由Toll like receptors介導(dǎo)的布拉氏酵母菌和枯草芽孢稈菌B10對肉雞腸黏膜免疫功能影響的研究.pdf

1、研制安全、高效、綠色的飼用添加劑產(chǎn)品以替代抗生素，是保障畜牧業(yè)健康發(fā)展的必然趨勢。益生菌制劑因其具有效果顯著、安全性好等諸多優(yōu)點(diǎn)已成為替代飼用抗生素的首選。布拉氏酵母和枯草芽孢桿菌是應(yīng)用較為廣泛的益生菌，能改善腸道健康、促進(jìn)動(dòng)物生長以及提高宿主的免疫力。盡管益生菌的免疫調(diào)節(jié)作用越來越受關(guān)注，但是到目前為止，機(jī)制尚未清楚。本論文以布拉氏酵母和枯草芽孢桿菌B10為材料，通過體外試驗(yàn)和體內(nèi)試驗(yàn)研究其對肉雞腸黏膜先天免疫的調(diào)節(jié)作用及可能機(jī)理。主

2、要的研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　 布拉氏酵母和枯草芽孢桿菌B10對肉雞生長、消化酶活性、抗氧化功能和血清生化指標(biāo)的影響。試驗(yàn)選用1日齡三黃肉雞300羽，隨機(jī)分為三組，每組設(shè)5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20羽。對照組飼喂含抗生素(維吉尼亞霉素，20 mg/kg)的基礎(chǔ)日糧，處理組在每千克基礎(chǔ)日糧（不添加抗生素）中分別添加1×108CFU/克飼料的布拉氏酵母(Bs)和枯草芽孢桿菌(Sb)。飼養(yǎng)試驗(yàn)為期72天。結(jié)果表明，與對照組相比，飼糧中添加益

3、生菌能顯著促進(jìn)肉雞生長，提高肉雞空腸Na+/K+ATP酶、脂肪酶和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活性，Sb還可以提高回腸中γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活性;顯著提高肉雞血清中谷胱甘肽過氧化物酶、谷胱甘肽還原酶、過氧化物酶、過氧化氫酶活性及谷胱甘肽、白蛋白和低密度脂蛋白含量，使丙二醛、尿酸和甘油三酯含量顯著降低。布拉氏酵母和枯草芽孢桿菌B10對肉雞腸道結(jié)構(gòu)和微生物菌群結(jié)構(gòu)的影響。益生菌組肉雞法氏囊和胸腺相對重量、腸絨毛高度、杯狀細(xì)胞數(shù)量均顯著高于對照組。添加益生菌

4、顯著提高了腸道緊密連接蛋白o(hù)ccluding、cloudin2及cloudin3mRNA表達(dá)水平。腸道菌群分析表明，益生菌組空腸和回腸內(nèi)菌群數(shù)量顯著增加，厚壁菌門的數(shù)量處于優(yōu)勢地位，而腸道內(nèi)菌群多樣性顯著降低。
　　 布拉氏酵母和枯草芽孢桿菌B10對肉雞腸道免疫功能及TLR信號(hào)通路基因mRNA表達(dá)的影響。與對照組相比，酵母菌處理組空腸和回腸黏膜中IL-1β TNFα、IL-7、IL-6、IL-4、IL-10和TGF-β和芽孢桿菌

5、組空腸和回腸黏膜TNFα、IL-17、IL-6和TGF-β水平顯著提高。益生菌處理組空腸黏膜INF-γ、IL-8含量及回腸黏膜INF-γ含量均顯著低于對照組。此外，益生菌處理組空腸IgA陽性細(xì)胞，血清IgA、sIgA水平顯著提高，其中酵母菌處理組IgG含量顯著高于對照組。益生菌處理組肉雞空腸黏膜Toll-樣受體TLR2、TLR4、TLR15和相關(guān)信號(hào)蛋白MyD88、TRAF6、TAB2和NF-κB基因表達(dá)水平顯著上調(diào)。
　　 布

6、拉氏酵母菌和枯草芽孢桿菌B10對雞骨髓源樹突狀細(xì)胞(DCs)免疫功能的影響。樹突狀細(xì)胞(DCs)是家禽調(diào)節(jié)免疫功能的重要靶細(xì)胞，但目前體外培養(yǎng)技術(shù)仍不成熟。本研究首先利用E.coli BL21成功表達(dá)了雞粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(chi-rGMCSF)，并建立了培養(yǎng)肉雞DC細(xì)胞的方法。隨后研究了布拉氏酵母菌和枯草芽孢桿菌B10對雞骨髓源樹突狀細(xì)胞(DCs)免疫功能的影響。DCs細(xì)胞分別與PBS(Ctr組)、LPS（LPS組）、布拉氏

7、酵母菌（Sb組）、芽孢桿菌組(Bs組)、布拉氏酵母菌+芽孢桿菌組(Sb+Bs組)共孵育3h、6h、12 h后進(jìn)行分析。掃描電鏡顯示益生菌能夠粘附于DCs表面，透射電子顯微鏡進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)DCs能夠有效吞噬和降解益生菌。與對照組相比，各處理組細(xì)胞表面分子MHC-Ⅱ、CD40、CD80和CD86基因表達(dá)水平均顯著上調(diào)。此外， TLR1、TLR2、TLR4、TLR15和相關(guān)信號(hào)蛋白MyD88、TRAF6、TAB1和NFκ-B基因表達(dá)水平也顯著