山定子遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以山定子葉片為實(shí)驗(yàn)材料，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，研究了抗生素及轉(zhuǎn)化過程中各因素對轉(zhuǎn)化的影響，成功獲得轉(zhuǎn)化Mxirt1基因的山定子轉(zhuǎn)基因植株，建立了山定子轉(zhuǎn)化體系，為山定子性狀的定向改良奠定基礎(chǔ)。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 研究了羧芐青霉素(Carb)、頭孢霉素(Cef)、卡那霉素(Kan)、潮霉素(Hyg)對山定子葉片愈傷組織和不定芽誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明，羧芐青霉素對山定子葉片再生有明顯的抑制作用，濃度低于450mg/L，的頭孢霉素對山

2、定子葉片愈傷和不定芽誘導(dǎo)影響不大。極低濃度的潮霉素即可導(dǎo)致山定子葉片大面積褐化死亡，不適合做篩選抗性芽的抗生素。Kan濃度為40mg/L時(shí)，恰好可完全抑制不定芽再生而不使葉片死亡，可作為山定子葉片轉(zhuǎn)化過程中合適的篩選壓力濃度。 通過比較在卡那霉素篩選培養(yǎng)基上的抗性芽百分率，研究激素配比、乙酰丁香酮、脯氨酸、共培養(yǎng)時(shí)間、預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、侵染時(shí)間、暗培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)基碳源及固化物對轉(zhuǎn)化的影響。結(jié)果表明：預(yù)培養(yǎng)不利于山定子葉片的轉(zhuǎn)化；菌液中