基因槍介導(dǎo)的棉花遺傳轉(zhuǎn)化及后代遺傳分析.pdf

1、本研究選用優(yōu)良的陸地棉品種GW2031和農(nóng)大KB18為受體材料，利用基因槍介導(dǎo)的方法，將含有根特異表達(dá)性啟動(dòng)子的phyA基因轟擊入供試品種的莖尖分生組織中，經(jīng)過卡那霉素抗性篩選，PCR、PCR-Southen和Southern斑點(diǎn)雜交等技術(shù)分析，獲得了兩個(gè)品種的轉(zhuǎn)基因植株，并得到了轉(zhuǎn)基因植株的T<,1>代和T<,2>代，進(jìn)一步對(duì)轉(zhuǎn)基因植株的后代進(jìn)行了遺傳和根系植酸酶活性的分析，為棉花現(xiàn)代分子育種增添新的內(nèi)容和新的種質(zhì)材料，同時(shí)為農(nóng)作物有

2、效利用土壤有機(jī)磷資源開辟一條經(jīng)濟(jì)有效的途徑。主要研究結(jié)果如下： 1．通過優(yōu)化培養(yǎng)基中各種成分，建立了成苗培養(yǎng)基。在莖尖培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)了外源激素GA<,3>和NAA的顯著作用，GA<,3>對(duì)莖尖分生組織基部的愈傷有較好的抑制作用，而NAA對(duì)莖尖的生根具有一定的作用。 2．本試驗(yàn)從基因槍轟擊到獲得經(jīng)PCR分析獲得轉(zhuǎn)基因植株共用了將近兩個(gè)月的時(shí)間，縮短了轉(zhuǎn)化和鑒定周期，確定了最適合篩選兩個(gè)品種的卡那霉素濃度梯度，即85、95、11

3、0、120、130、140mg/L，并獲得了卡那霉素抗性植株共39株，其中1株GW2031，38株農(nóng)大KB18。PCR-Southern驗(yàn)證的轉(zhuǎn)化植株共有32株，其中1株GW2031，31株農(nóng)大KB18，最終轉(zhuǎn)化率分別為1.59％和5.23％。 3．對(duì)農(nóng)大KB18轉(zhuǎn)基因單株1和單株2的部分單株做了Southern斑點(diǎn)雜交分析，發(fā)現(xiàn)不同時(shí)期的DNA雜交信號(hào)強(qiáng)度有很大的差異，其中棉葉幼嫩時(shí)提取的DNA其雜交驗(yàn)證效果較好。 4