白眉蝮蛇去整合素Adinbitor的定點(diǎn)突變對(duì)其生物學(xué)活性的影響.pdf

1、大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文白眉蝮蛇去整合素Adinbit的定點(diǎn)突變對(duì)其生物學(xué)活性的影響姓名：陳洪巖申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：趙寶昌20050601因?yàn)閷?duì)其他的整合素的廣泛的反應(yīng)性，含有RGD特征模體的蛇毒去整合素在體內(nèi)抗血栓形成方面的治療潛能受到了一定的限制‘13】【14】。而含有KGD序列的去整合素barbourin與蛇毒中其他的GPIIbIIIa拮抗劑具有高度的同源性，但卻是此家族中第一個(gè)不含有RGD序列的

2、成員，以保守的賴氨酸代替精氨酸是賦予barbourin整臺(tái)素作用的特異性的唯一的一個(gè)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，因?yàn)樯叨局泻匈嚢彼岬亩嚯念愃莆镆簿哂袑?duì)GPIIbIIIa高度特異性。因此，barbourin代表了一個(gè)具有特異結(jié)構(gòu)特征的有效的抗GPIIbIIIa的代表而成為很有價(jià)值的血小板聚集抑制劑【l51。從barbourin中得到啟示，本論文中采用定點(diǎn)突變的方法以賴氨酸(K)代替RGD序列中的精氨酸(R)，實(shí)驗(yàn)中首先設(shè)計(jì)突變引物采用PCR的方法進(jìn)行定點(diǎn)

3、突變。將突變Adinbitor基因進(jìn)行克隆、轉(zhuǎn)化與誘導(dǎo)后，得到了該蛋白的可溶性高效表達(dá)。經(jīng)組氨酸親和層析純化，獲得了分子量為9KD的均質(zhì)蛋白。利用人富含血小板血漿的測(cè)試系統(tǒng)進(jìn)行的血小板聚集實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，突變r(jià)Adinbitor也可呈劑量依賴性方式抑制由ADP誘導(dǎo)的人血小板聚集。其抑制人血小板聚集的IC50=008lxmol／L，與rAdinbitor相比兩者在抗血小板聚集作用方面沒(méi)有顯著的差異。血管新生的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，rAdinbito

4、r可顯著抑制體內(nèi)血管新生作用，與rAdinbitor相比，突變r(jià)Adinbitor目[JKGD—rAdinbitor(下文均采用此名稱)未檢測(cè)到對(duì)體內(nèi)血管新生的抑制作用?？傊?，本論文通過(guò)定點(diǎn)突變的方法成功的獲得了KGD序列代替RGD序列的rAdinbitor，并成功的改變了其生物學(xué)活性。獲得了能顯著抑制血小板聚集而無(wú)明顯的抑制血管新生作用的去整合素。所有這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，KGDrAdinbitor作為含有KGD序列的去整合素的典型代表，