APP-PS1轉基因小鼠的軸漿運輸及其阿爾茨海默病發(fā)病機制.pdf

1、神經元中的軸漿運輸可以進行物質的運輸、信息的交流以及能量的轉運，而與軸漿運輸密切相關的兩種重要蛋白kinesin1和轉鐵蛋白受體1(TfR1）的異常表達會對阿爾茨海默病(AD)的發(fā)生造成不同程度的影響。TfR1是位于突觸后膜上一種跨膜蛋白，通過其介導的內吞循環(huán)而參與了軸漿運輸與轉運。淀粉樣前體蛋白（APP）可以通過其羧基末端與kinesin1分子發(fā)生直接連接，從而作為kinesin1的受體參與了軸漿運輸，且APP基因突變可以引起軸漿運輸

2、障礙且常伴隨有腦內TfR1表達的異常。軸漿損傷可能是最早出現(xiàn)的一種AD病理變化的表征，甚至要早于老年斑和神經纖維的形成，但是目前很少有研究報道 kinesin1與TfR1在AD病理發(fā)生、發(fā)展中的表達變化以及與軸漿運輸障礙之間的關系。本文利用APP/PS1轉基因小鼠建立AD模型，系統(tǒng)研究AD病理改變進程中的軸漿損傷現(xiàn)象以及kinesin1和TfR1與神經元軸漿運輸功能障礙之間的聯(lián)系。
　　目的：探討軸突運輸?shù)鞍譳inesin1、Tf

3、R1和神經絲蛋白（SIM-312）在阿爾茨海默病發(fā)生、發(fā)展中的作用以及轉鐵蛋白受體1對神經元以及其異常表達對阿爾茨海默癥神經元的保護作用。
　　方法：組織水平利用免疫熒光染色和Western blot技術檢測APP/PS1轉基因小鼠和野生型小鼠大腦皮層內老年斑的沉積及星形膠質細胞的分布以及在大腦皮質發(fā)育過程中kinesin1、TfR1和SIM-312陽性細胞個數(shù)及蛋白表達變化；細胞水平取新生小鼠原代海馬神經元進行培養(yǎng)，培養(yǎng)12天后

4、使用TfR1 shRNA pGFP-V-RS干擾質粒對其進行轉染，采用Western blot技術檢測TfR1的表達變化；Elisa來檢測經干擾前后的細胞Aβ1-42分泌量；利用TfR1、MAP2來標記神經元的突起，觀察經干擾前后突起的形態(tài)變化；利用FM1-43染色來觀察由TfR1介導的軸漿運輸中囊泡的運輸情況。
　　結果：①TfR1在APP/PS1轉基因小鼠的生長發(fā)育過程中隨著年齡的增長呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢。② TfR1 sh

5、RNA干擾后可以使原代神經元細胞內TfR1基因沉默，使其突起明顯變細、變長影響囊泡的運輸。與對照組相比，TfR1基因沉默在 APP/PS1轉基因小鼠原代神經元中表達量減少，熒光減弱。③APP/PS1轉基因小鼠與正常對照組相比，Aβ斑塊增多，星形膠質細胞數(shù)目增多，神經元減少；而 kinesin1陽性細胞的數(shù)量在APP/PS1轉基因小鼠生長發(fā)育過程中減少，且在P9M之后與野生型小鼠之間存在著顯著的差異；SIM-312標記的神經絲蛋白隨著年齡