微管蛋白抑制劑ZP-20f對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌周期及凋亡的作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)采用MTT實(shí)驗(yàn)，Western Blot實(shí)驗(yàn)，平板克隆實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)微管蛋白抑制劑ZP-20f對(duì)體外培養(yǎng)的口腔鱗癌細(xì)胞的增殖、凋亡及細(xì)胞周期的影響，并進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)分析。探討微管蛋白抑制劑Zp-20f在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1、口腔鱗癌SCC-9、CAL-27細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)。
　　2、MTT法檢測(cè)Zp-20f對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞SCC-9、CAL-27細(xì)胞的毒性作用，并計(jì)

2、算最實(shí)試驗(yàn)濃度IC50。
　　3、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)口腔鱗癌細(xì)胞SCC-9、CAL-27細(xì)胞的周期及凋亡率。
　　4、應(yīng)用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)分析Zp-20f對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞SCC-9、CAL-27的毒性效應(yīng)。
　　5、Wetern Blot檢測(cè)SCC-9、CAL-27細(xì)胞中相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1、ZP-20f可顯著抑制口腔鱗癌細(xì)胞增殖 ZP-20f在一定濃度范圍內(nèi)能顯著抑制口腔鱗癌的增殖作用

3、，且其抑制活性具有濃度依賴作用。平板克隆實(shí)驗(yàn)可以看出ZP-20f能濃度依賴的抑制腫瘤細(xì)胞克隆的形成。
　　2、ZP-20f可在G2/M期阻滯細(xì)胞周期 ZP-20f在一定濃度范圍內(nèi)能顯著誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞G2/M期阻滯，并具隨著化合物濃度的增加，G2/M期細(xì)胞比例隨之增加。
　　3、ZP-20f可在G2/M期阻滯細(xì)胞周期 ZP-20f在一定濃度范圍內(nèi)能顯著誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞G2/M期阻滯，并具隨著化合物濃度的增加，G2/M期細(xì)胞比

4、例隨之增加。
　　4、細(xì)胞周期相關(guān)蛋白量發(fā)生變化化合物在一定濃度范圍內(nèi)能引起細(xì)胞內(nèi)周期和凋亡相關(guān)蛋白含量的變化，使細(xì)胞中周期與凋亡相關(guān)蛋白Cycling B1、p-H3和cleaved-PARP的量顯著增加，且具有濃度依賴性（圖5）。
　　結(jié)論：
　　1、 ZP-20f對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞SCC-9和Cal-27的體外增殖抑制活性較強(qiáng)，能明顯將細(xì)胞周期阻滯在G2/M期，并能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
　　2、ZP-20f在體外有較