巰基氧化酶1對(duì)人SMMC-7721肝癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響研究.pdf

1、背景與目的:肝癌是我國(guó)常見腫瘤之一，肝癌發(fā)病機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜，遺傳、飲食、病毒和寄生蟲感染等均可與肝癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)。隨著分子生物學(xué)發(fā)展，有多種肝癌相關(guān)基因經(jīng)過相同或不同研究者多次研究，被認(rèn)為可能參與到肝癌的發(fā)病過程中。Araujo等發(fā)現(xiàn)QSOX1在高分化的神經(jīng)母細(xì)胞瘤腫瘤組織中高表達(dá)，且在復(fù)發(fā)率高的病人中也出現(xiàn)高表達(dá)。另外，他們還發(fā)現(xiàn)QSOX1在神經(jīng)母細(xì)胞瘤的分化和侵襲中起重要作用。QSOX1也被認(rèn)為可能參與到乳腺癌、前列腺癌等的發(fā)生發(fā)展過

2、程。目前關(guān)于QSOX1與肝癌的發(fā)生發(fā)展間關(guān)系的研究報(bào)道甚少，本研究進(jìn)一步驗(yàn)證QSOX1在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，揭示QSOX1對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)功能所發(fā)揮的作用，為肝癌早診和治療提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:針對(duì)QSOX1的shRNA慢病毒載體的構(gòu)建由上海吉?jiǎng)P基因技術(shù)有限公司完成。將針對(duì)QSOX1的shRNA慢病毒載體，以及空病毒載體（帶有陰性對(duì)照病毒）各轉(zhuǎn)染至人SMMC-7721肝癌細(xì)胞，即分別為轉(zhuǎn)染

3、組和陰性對(duì)照組。空白對(duì)照組為不做任何轉(zhuǎn)染的目的細(xì)胞。經(jīng)篩選出穩(wěn)定表達(dá)株后擴(kuò)大培養(yǎng)，采用實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增(qPCR)檢測(cè)系統(tǒng)，及免疫印跡法(Western-blot)分別檢測(cè)細(xì)胞中QSOX1基因mRNA和蛋白質(zhì)在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)情況;運(yùn)用CCK-8法通過檢測(cè)細(xì)胞活力以驗(yàn)證細(xì)胞增殖情況;采用細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞成瘤能力;利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期;運(yùn)用細(xì)胞Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)分別測(cè)定細(xì)胞轉(zhuǎn)移和遷移能力。通過SPSS17

4、.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:慢病毒轉(zhuǎn)染組和對(duì)照病毒轉(zhuǎn)染組均成功轉(zhuǎn)染;慢病毒轉(zhuǎn)染組QSOX1基因mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)均分別明顯低于空病毒轉(zhuǎn)染組和空白對(duì)照組;經(jīng)CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，慢病毒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖相對(duì)于其他對(duì)照組明顯減緩（P＜0.05）;慢病毒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞克隆數(shù)量分別明顯低于其他對(duì)照組;流式細(xì)胞術(shù)分析表明，慢病毒轉(zhuǎn)染組與空細(xì)胞組比較，慢病毒轉(zhuǎn)染組G1期細(xì)胞所占比例明顯減少，而S期明顯增多，在G2/M期無明顯變化;

5、慢病毒轉(zhuǎn)染組與空病毒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞相比，慢病毒轉(zhuǎn)染組G1期細(xì)胞也明顯減少，而S期細(xì)胞無顯著變化，G2/M期細(xì)胞明顯增多。通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞在O小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)的遷移情況，結(jié)果顯示，慢病毒轉(zhuǎn)染組遷移能力在24小時(shí)明顯降低。細(xì)胞transwell轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)顯示，空細(xì)胞組和空病毒組細(xì)胞轉(zhuǎn)移數(shù)無明顯差異，而慢病毒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞轉(zhuǎn)移數(shù)明顯減少。
　　結(jié)論:通過慢病毒轉(zhuǎn)染，干擾QSOX1基因在SMMC-7721細(xì)胞中的表達(dá)，能降低SMMC-