重組法國梧桐花粉過敏原(rPla a2)對小鼠ORMDL3基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制初步研究.pdf

1、目的:分析轉(zhuǎn)錄因子GATA3對小鼠ORMDL3基因轉(zhuǎn)錄的影響機(jī)制，探索重組法國梧桐花粉過敏原rPla a2對小鼠ORMDL3基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響及相關(guān)機(jī)制，為植物吸入性過敏原所致過敏性哮喘的防治尋找新的靶點(diǎn)提供思路。
　　方法:(1)染色質(zhì)免疫沉淀、RNA干擾、轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)、雙熒光素酶活性分析等實(shí)驗(yàn)，鑒定GATA3與小鼠ORMD3啟動(dòng)子結(jié)合和啟動(dòng)子活性的調(diào)控作用;(2)通過實(shí)時(shí)定量PCR和Western Blot實(shí)驗(yàn)，觀察GATA

2、3對小鼠ORMDL3表達(dá)水平的影響;(3)利用法國梧桐花粉重組過敏原rPla a2探索對小鼠ORMDL3啟動(dòng)子活性、mRNA及蛋白表達(dá)的影響，用ChIP-qPCR觀察rPla a2刺激后GATA3與小鼠ORMDL3啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合的影響。
　　結(jié)果:(1) ChIP實(shí)驗(yàn)表明GATA3與小鼠ORMDL3核心啟動(dòng)子-74bp至+141bp結(jié)合，但不能與小鼠ORMD3基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-921至-835 bp序列結(jié)合。(2) RNA干擾、

3、轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western Blot實(shí)驗(yàn)證明GATA3能正向調(diào)控ORMDL3的表達(dá)。(3) rPla a2上調(diào)小鼠ORMDL3啟動(dòng)子活性，突變GATA3和STAT6結(jié)合序列后該上調(diào)作用受抑制，rPla a2促進(jìn)ORMDL3和GATA3表達(dá)，干擾GATA3表達(dá)可抑制rPla a2對ORMDL3的上調(diào)作用。ChIP-qPCR實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)rPla a2增強(qiáng)GATA3與ORMDL3啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合。
　　結(jié)論:(1) G